[发明专利]一种微藻培养液的常温保存方法

说明书

本发明公开了一种微藻培养液的常温保存方法，涉及的微藻种类包括蛋白核小球藻、固氮鱼腥藻和小单歧藻，属于微藻生物技术领域。通过在微藻培养液（藻细胞浓度2.0×10⁷个/mL～4.0×10⁷个/mL）中添加三碘苯甲酸和山梨酸钾、添加甘油和山梨醇、添加营养物质（葡萄糖、酵母浸粉），并调整pH，采用不透明塑料桶包装。微藻培养液在干燥、阴凉的室内常温保存6个月，活藻细胞浓度为1.40×10⁷个/mL～2.92×10⁷个/mL，藻细胞存活率为70%～73%，满足微藻培养液作为微生物肥料的质量要求。

技术领域

本发明涉及一种微藻培养液的常温保存方法，尤其是蛋白核小球藻、固氮鱼腥藻和小单歧藻的常温保存方法，属于微藻生物技术领域。

背景技术

微藻是一类能进行光合作用的微生物，具有固碳、固氮能力强，产生胞外多糖和植物激素等活性成分，易于培养等特点。微藻培养液具有改善土壤理化性质、增强土壤理化性质、增强土壤肥力、促进作物生长、提高作物产量与品质的作用。微藻培养液作为微生物肥料已经应用于农业生产，特别是设施蔬菜和水果种植。用于农业生产的常见微藻种类有蛋白核小球藻（Chlorella sp）、固氮鱼腥藻（Anabaena azotica）、小单歧藻、螺旋藻等。微藻培养液作为微生物肥料时需要活的微藻细胞。只有活的微藻细胞才能在土壤中生长、固碳、固氮、分泌生理活性物质，发挥其肥料功效。然而，微藻培养液在储存和运输时微藻细胞很容易死亡，特别是在夏季的高温条件下藻细胞更容易死亡。藻细胞浓度为1×10⁶个/mL以上时，微藻培养液一般自然状态下仅能保存7～10天。采用低温储运可以降低藻细胞死亡率，但需要制冷设备，投资大，运行成本高，难于在实际生产上应用。如何在常温下保持微藻培养液高的藻细胞存活率是微藻生物肥生产中亟需解决的问题。

专利文献CN107325971 A公开了一种淡水微藻常温液态保存配方和制作方法，该配方包含有藻细胞数≥10²⁰CFU/mL的藻类浓缩液、藻类营养液、均质剂， 将pH调至11。 该保存方法使藻细胞暂时休眠，常温液态可保存4个月，但这种方法只适用于藻种的保存，而且保质期较短。专利文献CN 110628632A公开了一种小球藻藻种常温保存的方法，该保存方法是首先将藻细胞浓度调整为2.0×10⁶～5.0×10⁶个/mL，然后加入0 .8～1 .0 g/L尿素、0.4～0.6 g/L KH₂PO₄、0.25～0.30 g/L NaHCO₃、0.05g/L EDTA-2Na、0.07g/L MgSO₄，充分搅拌溶解后，再加入0.05％～0.10％甘油和0.006%～0.010%山梨酸钾或苯甲酸钠；调节pH终点为6.9～7.1，常温、弱光放置保存3个月后藻种的存活率可达90％以上。该方法适用于低浓度藻种的常温保存，保质期也不够长。专利文献CN 110157621A公开了一种高浓缩微藻活细胞长效保存剂的制备方法， 该保存剂是通过将光合菌荚膜红假单胞菌与嗜盐菌嗜盐单胞菌在谷氨酸盐培养基中发酵培养获得菌泥， 然后将菌泥包埋在海藻酸钠载体颗粒里，继续将含有无机盐、维生素、有机碳源等营养基质粉末吸附于载体颗粒中，获得光合菌载体颗粒营养盐混合颗粒，经喷雾干燥与粉末均质后制成。该保存剂维持浓缩藻活细胞10-30天的活力而无腐败出现。专利文献CN 113662124A公开了一种微藻保鲜组合物、保鲜剂及其保存方法，该微藻保鲜组合物包括溶菌酶、肉桂精油和苦皮藤素，在该组合物中进一步添加苯甲酸钠、脱氢乙酸钠、羧甲基纤维素钠和硫酸庆大霉素， 获得微藻保鲜剂。该保鲜剂用于常温保存微藻藻液或藻泥，保存时间可长达6个月。该保鲜剂生产、使用成本高，难于应用于微藻培养液（肥料）的实际生产。

发明内容

本发明为解决上述技术问题，提供一种微藻培养液的常温保存方法，使得微藻细胞在常温储存条件下仍然保持较高的存活率，延长微藻培养液的保质期，为发挥肥效奠定基础。