[发明专利]一种大鼠心梗组织提取液、外泌体及其应用

说明书

本申请提出了一种大鼠心梗组织提取液、外泌体及其应用，涉及生物医药技术领域。大鼠心梗组织提取液的制备方法为：将经过急性心梗造模后的大鼠处死，采集心脏；采用冠状坐标对应心尖的方向切取组织块，将组织块放置在DMEM培养基中匀浆；收集上清液装入无菌管中储存即可。采用上述提取液处理间充质干细胞的方法为：将来源于大鼠骨髓的间充质感细胞在大鼠心梗组织提取液中培养，然后在不含外泌体的完全培养基中进行二次培养，收集上清液，分离提取外泌体。通过将间充质干细胞经大鼠心梗组织提取液培养后，可以优化充质干细胞的外泌体内容物成分，提高外泌体中miR‑133a的表达量，进而提高外泌体对急性心肌梗死的治疗效果。

技术领域

本申请涉及生物医药技术领域，具体而言，涉及一种大鼠心梗组织提取液、外泌体及其应用。

背景技术

心肌梗死作为一种最常见的心血管疾病，是目前全世界范围内患病率和致死率最高的疾病之一。尽管目前急性心肌梗死治疗的主流方法不少，包括药物溶栓、外科搭桥手术和经皮冠状动脉介入治疗，在恰当的适应症下灵活运用这些方法已经使得心肌梗死患者死亡率显著降低。但在心肌梗死后，心肌细胞的自身内源性增殖非常有限，很难完全代偿已经梗死的心肌细胞。因此，人们对开发基于细胞的疗法以促进组织修复和逆转重塑受损的心肌有着浓厚的兴趣。

间充质干细胞(MSCs)移植在心血管系统疾病方面的临床研究结果，发现在一项间充质干细胞移植治疗急性心肌梗死的2期临床研究中(NCT00877903)，骨髓来源的间充质干细胞移植后的临床获益效果显著。不仅如此，还有大量国内外的临床前研究也证实了移植骨髓间充质干细胞在治疗急性心肌梗死的应用上具有广阔的前景。然而，在骨髓间充质干细胞移植治疗过程中，医源性肿瘤形成、细胞排斥和灌注毒性的风险仍然是需要未来进一步解决的关键问题。

与骨髓间充质干细胞比较，其分泌的外泌体体积更小，结构更简单，并且更容易获得和存储；其次，外泌体不是细胞，没有医源性肿瘤形成的风险；再者，外泌体中膜结合蛋白的含量较低，比其母体细胞免疫原性更低，发生免疫排斥机率甚微。越来越多的研究揭示了在损伤组织中应用外泌体治疗可以达到间充质干细胞几乎同样的作用，并且可以避免干细胞移植所带来一系列风险因素，其中包括急性心肌梗死。

除了原生的间充质干细胞，研究者们还通过生物工程的一系列方法来改造间充质干细胞，期望进一步提高间充质干细胞发挥保护作用的能力，其中包括通过遗传基因工程的方式来改变间充质干细胞的可塑性。目前，尚无关于经心梗组织提取液预处理骨髓间充质干细胞的方法来提高其来源外泌体用于急性心肌梗死治疗效果的报道。

发明内容

本申请的目的在于提供一种大鼠心梗组织提取液，此大鼠心梗组织提取液可以优化充质干细胞的外泌体内容物成分，提高外泌体中miR-133a的表达量。

本申请的另一目的在于提供一种采用上述大鼠心梗组织提取液处理间充质干细胞的方法，该方法简单且高效。

本申请的另一目的在于提供一种由上述大鼠心梗组织提取液处理间充质干细胞的方法得到的外泌体及其在制备心肌梗死的治疗药物中的应用。

本申请解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。

一方面，本申请实施例提供一种大鼠心梗组织提取液，其采用以下制备方法制成：

将经过急性心梗造模后的大鼠处死，采集心脏；采用冠状坐标对应心尖的方向切取组织块，然后将组织块放置在DMEM培养基中进行匀浆；收集匀浆后的上清液，装入无菌管中储存，即得到所述大鼠心梗组织提取液。

另一方面，本申请实施例提供一种采用上述大鼠心梗组织提取液处理间充质干细胞的方法，包括以下步骤：

从大鼠骨髓中提取间充质感细胞；将间充质感细胞在大鼠心梗组织提取液中培养，然后在不含外泌体的完全培养基中进行二次培养，然后收集上清液，分离提取外泌体。