[发明专利]高效纤维素酶分离提纯方法

说明书

本发明涉及纤维素酶技术领域，具体为高效纤维素酶分离提纯方法，该方法的步骤如下：步骤一、清洗；步骤二、破壁；步骤三、振荡溶解；步骤四、初步分离提纯；步骤五、二次提纯；本发明通过使用PH5.5乙酸‑乙酸钠缓冲液作为提取液比使用蒸馏水和PH5.5磷酸‑柠檬酸为提取液效果更好，提高了纤维素酶的提取的速度，缓冲液和通过使用质量分数为20％的硫酸铵作为盐析法提纯用的盐，可以使得纤维素酶的活力的效果最好，从而大大的提高了纤维素酶的分离纯化的速度。

技术领域

本发明涉及纤维素酶技术领域，具体为高效纤维素酶分离提纯方法。

背景技术

纤维素酶是一种重要的酶产品，是一种复合酶，主要是外切β-葡聚糖酶，内切β-葡聚糖酶和β-葡聚糖苷酶等组成，还是很高活力的木聚糖酶，目前用于生产纤维素酶的微生物较多的是丝状真菌，其中酶活力较强的菌种为木酶、曲霉、根酶和青酶，以木酶属菌种居多，较为典型的有里氏木酶、绿色木酶、康氏、木酶。但是丝状真菌中纤维素酶的分离提纯过程中，极易受到酶活力的影响，从而影响到提纯出纤维素酶的质量和效率。鉴于此，我们提出高效纤维素酶分离提纯方法。

发明内容

为了弥补以上不足，本发明提供了高效纤维素酶分离提纯方法。

本发明的技术方案是：

高效纤维素酶分离提纯方法，该方法的步骤如下：

步骤一、清洗；

步骤二、破壁；

步骤三、振荡溶解；

步骤四、初步分离提纯；

步骤五、二次提纯。

优选的，步骤一的具体操作步骤为：选用10g的木酶、曲霉、根酶或者青酶菌种用于生产提取纤维素酶，然后将选取的菌种多次用无菌水进行清洗，直至将选取菌种表面异物清洗干净。

优选的，步骤二的具体操作步骤为：在0-4℃的冷却条件下，将步骤一中清洗干净的菌种放置在细菌磨上研磨20秒，用于破碎菌种的细胞壁和细胞膜。

优选的，步骤三的具体操作步骤为：选用25ml蒸馏水、25ml PH5.5的乙酸-乙酸钠或25ml PH5.5磷酸-柠檬酸为提取液置于步骤二中的细菌磨内,并用搅拌棒将细菌磨内的液体进行搅拌15分钟，然后在0℃时，用离心机在13000转/分的转速下离心20分钟，此时破碎菌种内的纤维素酶大分部已经充分的溶解到提取液中，只需将离心后得到的上清液倒出22ml，并对细菌磨内下方残留的粘性沉淀物质再次用4ml提取液进行溶解、分离，并倒出4ml的上清液合并到第一次倒出的22ml的上清液中，得到26ml的粗提液。

优选的，步骤四采用盐析法对步骤三中得到的粗提液进行初步提纯，步骤四的具体操作步骤为：将步骤三中得到的粗提液中加入3.90g的硫酸铵粉末，并搅拌10分钟，放置1-1.5小时后，会有少量沉淀物产生，然后对粗提液进行13000转/分离心20分钟后，除去沉淀物，再对上清液中加入3.55g硫酸铵粉末，搅拌10分钟，静止2-4小时，再用13000转/分离心20分钟，然后收集沉淀物，收集的沉淀物即为初步分离提纯的纤维素酶。