[发明专利]一种利福平中有关物质的检测方法及其在MNP监测中的应用

说明书

本发明涉及药物检测领域，尤其涉及一种利福平中有关物质的检测方法及其在MNP监测中的应用。本发明提供的方法包括：供试品溶液和对照溶液的配置，采用高效液相色谱法测定利福平中利福平及有关物质的含量，以醌式利福平作为指针性杂质，采用高效液相色谱法对利福平的遗传毒性杂质MNP进行含量监测；固定相采用C8色谱柱；流动相A为含有磷酸二氢钾和枸橼酸的溶液，流动相B包含甲醇和乙腈。本发明方法在更好地检测利福平有关物质的同时，也能监控MNP的含量，降低MNP超标的风险并提高检验效率。

技术领域

本发明涉及药物检测领域，尤其涉及一种利福平中有关物质的检测方法及其在MNP监测中的应用。

背景技术

遗传毒性杂质(Genoto Impurities，GTI)，是指能够直接或间接损伤细胞DNA，造成DNA突变并伴有致癌性危害人类健康的物质。

亚硝胺类遗传毒性杂质是其中一种危害较大的杂质，被列为“特殊关注队列”。

遗传毒性杂质会对患者产生极大危害，极微量水平即可诱发 DNA突变。且该杂质对人体的伤害不成剂量关系。因此对遗传毒性杂质的评价和限度控至关重要。从杂质来源看，将杂质完全清除是不可实现的，也没有必要。但可以通过合适的分析方法，找出与遗传毒性杂质产生相关的指针性杂质，可以有效掌握遗传毒性杂质的生成情况，从而有针对性的改进生产工艺，避免了缺乏灵敏度较高的质谱检测仪而无法对遗传毒性杂质生成情况进行评估，同时也为指针性杂质标准的控制提供依据。

2020年8月，利福平中发现了亚硝胺类遗传毒性杂质1-甲基-4- 亚硝基哌嗪(MNP)。起初FDA规定MNP的限度为0.16ppm，后来考虑到该药物对患者的作用和风险与遗传毒性杂质潜在的风险对比，将其限度暂定为5ppm。利福平是一种重要的抗结核药物，是目前市场上结核病需求量最大的药品之一。结核病人一旦用药就得长期服用不可中途停药，因此对遗传毒性杂质MNP的检测和监测都至关重要。目前一般采用LC-MS技术对痕量的遗传毒性杂质MNP 进行检测。但高灵敏度的质谱仪价格昂贵，在各个生产企业并不普遍，使其无法及时对生产的利福平中的MNP进行检测。同时现行的欧洲药典、日本药典、中国药典中利福平有关物质检测方法，利福平、醌式利福平和周围杂质的分离度不能达到检测要求(如图2-4 所示)。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种利福平中有关物质的检测方法及其在MNP监测中的应用。

第一方面，本发明提供的利福平中有关物质的检测方法，包括供试品溶液和对照溶液的配置，采用高效液相色谱法测定利福平中利福平及有关物质的含量，以醌式利福平作为指针性杂质，采用高效液相色谱法对利福平的遗传毒性杂质MNP进行含量监测；固定相采用C8色谱柱；流动相A为含有磷酸二氢钾和枸橼酸的溶液，流动相B包含甲醇和乙腈。

本发明采用特定的流动相和固定相能更准确检测利福平有关物质的同时，通过本发明开发建立的利福平有关物质检测-采用指针性杂质对MNP含量监测的方法，能有效监控MNP的含量，降低 MNP超标的风险，提高检验效率。

根据本发明，亚硝胺类化合物的产生的原因复杂且多样，可能来源于生产工艺，主要包括药物合成中发生的副反应，生成具有遗传毒性的N-亚硝胺类杂质，如仲胺类化合物与亚硝酸等亚硝化试剂相互作用。硝基胺高温下的还原反应，以及肼类化合物在药物生产或储存时发生氧化还原反应等。还有可能来源于催化剂、储存过程、包装材料以及并线生产等。发明人根据利福平与MNP的结构并加实验验证，证实利福平中MNP的形成主要与氧化反应有关。通过对利福平中遗产毒性杂质MNP的来源、不同MNP含量的利福平的杂质谱对比分析，发现利福平胶囊中醌式利福平含量与MNP的相关性，因此本发明将醌式利福平作为监测利福平中MNP含量的指针型杂质。