[发明专利]尿液中结合珠蛋白含量检测的化学发光免疫分析试剂盒及其分析方法

说明书

本发明公开了一种尿液中结合珠蛋白含量检测的化学发光免疫分析试剂盒，包括检测试剂，所述检测试剂包括第一试剂、第二试剂，第一试剂为磁微粒包被的HP抗体溶液，第二试剂为由标记物标记的HP抗体；还公开了一种尿液中结合珠蛋白含量检测的化学发光免疫分析方法。本发明采用磁微粒包被HP抗体，标记物标记另一株HP抗体的双抗体夹心化学发光法对尿液中HP进行定量检测，其灵敏度、重复性等性能均优于板式化学发光、免疫比浊法及免疫层析法等现有方法，且该试剂盒能够与大型化学发光免疫分析仪、小型化学发光免疫分析仪及单人份化学发光免疫分析仪均可配套使用，满足临床不同需求。

技术领域

本发明涉及结合珠蛋白检测技术领域，特别是涉及一种尿液中结合珠蛋白含量检测的化学发光免疫分析试剂盒及其分析方法。

背景技术

结合珠蛋白(haptoglobin，HP)又称触珠蛋白，是一种分子量为85000的酸性糖蛋白，广泛存在于人类和多种哺乳动物的血清及体液中。其主要在肝脏分泌，有HP1和HP2两种等位基因，可形成3种潜在的基因型：HP1-1、HP2-1和HP2-2，具有结合游离血红蛋白及抗氧化等功能。

通常认为，糖尿病肾病(DKD)及其进展为终末期肾病(ESRD)的风险与蛋白尿的进展密切相关；但报道显示，几乎所有1型及大部分2型糖尿病患者出现微量白蛋白尿时已有不同程度的肾脏损害，且很多患者有进行性肾脏损害而尿白蛋白却没有增加，甚至处于正常白蛋白尿的状态，因此尿白蛋白作为预测糖尿病肾病的生物标记物其特异度和敏感度都远远不够。肾活检病理学检查是目前诊断DKD的金标准，但其创伤程度高，一般不用于早期筛查和诊断。随着蛋白组学技术的迅速发展，关于尿蛋白质组学在DKD早期诊断方面的研究取得了显著进展。证据证明尿中Hp来源于肾脏近曲小管细胞，多个动物水平的研究证明Hp定位于肾脏近曲小管上皮细胞。急性肾功能损伤引起近端小管上皮细胞Hp基因发生快速、显著和持续的表达，Hp是肾损伤反应的参与者。通过对不同糖尿病患者尿蛋白质组的研究证实，尿Hp在早期DKD中可预测肾功能的进展。尿HP是糖尿病肾病的潜在生物标志物，与糖尿病肾病发生、发展、诊断及预后密切相关。

山东博科生物产业有限公司申报的《一种高度稳定、灵敏的结合珠蛋白(HP)检测试剂盒》(专利号：CN201810922651.4)，采用免疫比浊法且检测样本为血液。中生北控生物科技股份有限公司申报的《测定血清中结合珠蛋白的方法及其检测试剂盒》(专利号：CN201010562220.5)，采用免疫比浊法且检测样本为血液。北京市糖尿病研究所申报的《用于检测尿液中微量触珠蛋白的化学发光试剂盒及方法》(专利号：CN202010178072.0)，采用板式化学发光，发光体系为辣根氧化物酶HRP-鲁米诺体系。检测血液中尿结合珠蛋白，主要应用于各种血管内溶血性疾病诊断，与尿液中尿结合珠蛋白检测临床应用不同。在免疫分析中，固相载体一般分为板式和磁微粒，板式化学发光是将抗原/抗体包被在微孔板上，与酶联免疫分析技术一致，只是将显色剂改为发光剂，由于结合在反应孔中，其反应面积有限，检测线性范围较磁微粒法窄，检测时长约1.5小时，精密度一般为5％-7％。磁微粒化学发光是将抗原/抗体包被在一种表面带有特定活性基团(羧基、甲苯磺酰基、链酶亲和素等)、大小均匀、具有超顺磁性的微粒上，待检测样本与包被有抗原/抗体的磁微粒在一定条件下孵育，通过外部磁场，结合在磁微球上的结合物与未结合物可进行分离，加入底物液/启动试剂，即可检测发光信号。其检测范围宽，检测时长一般约20-30min且支持急诊临时插入标本，精密度一般为1％-3％。板式与磁微粒化学发光配套的化学发光仪不同，板式化学发光配套使用单独测量仪或板式一体型全自动机型，磁微粒化学发光配套使用全自动管式化学发光仪。

因此亟需提供一种新型的尿液中结合珠蛋白含量检测的化学发光免疫分析试剂盒及其分析方法来解决上述问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种尿液中结合珠蛋白含量检测的化学发光免疫分析试剂盒及其分析方法，能够灵敏、快速地对尿液中的HP进行定量检测。