[发明专利]一种小麦矮杆基因Rht15紧密连锁的KASP标记及在小麦上的应用

权利要求书

1.一种小麦矮杆基因Rht15紧密连锁的KASP标记，其特征在于：所述小麦矮杆基因Rht15位于小麦6A染色体上，与其紧密连锁的KASP标记为6A-031，所述小麦矮杆基因Rht15与6A-031的遗传距离为1cm；

所述KASP标记6A-031对应的引物包括两条正向特异引物F-矮、F-高和一条共用反向引物R；

所述正向特异引物F-矮的核苷酸序列为5’GTCGATGAAGATGACGTGCA 3’；

所述正向特异引物F-高的核苷酸序列为5’GTCGATGAAGATGACGTGCG 3’；

所述共用反向引物R的核苷酸序列为5’CCCGCGAGATTTATGGAGCA 3’。

2.根据权利要求1所述的一种小麦矮杆基因Rht15紧密连锁的KASP标记，其特征在于：在合成KASP标记6A-031对应的引物时，所述正向特异引物F-矮的5’端加上HEX荧光接头序列，HEX荧光接头序列为5’GAAGGTCGGAGTCAACGGATT 3’；

所述正向特异引物F-高的5’端加上FAM荧光接头序列，FAM接头序列为5’GAAGGTGACCAAGTTCATGCT 3’。

3.一种小麦矮杆基因Rht15紧密连锁的KASP标记在小麦上的应用，基于权利要求1-权力要求2所述的一种小麦矮杆基因Rht15紧密连锁的KASP标记，其特征在于：筛选步骤如下所示：

步骤1、检测：采用KASP标记6A-031的引物，对待测小麦材料的基因组DNA进行PCR扩增和基因分型；

步骤2、结果判断：基于分型结果中显示为蓝色、绿色的材料为具有矮杆基因Rht15的小麦材料；结果显示蓝色的材料为纯合矮杆材料；结果显示绿色的材料为杂合矮杆材料；结果显示红色的材料为不含矮杆基因Rht15的高秆材料；结果显示黑色的材料为阴性对照；结果显示紫色的材料为分型失败的材料。

4.根据权利要求3所述的一种小麦矮杆基因Rht15紧密连锁的KASP标记在小麦上的应用，其特征在于：所述PCR扩增反应体系为5μL，包括2.5μL的2*KASP Master mix、0.056μL的混合引物、100ng的基因组DNA、超纯水补足至5μL。

5.根据权利要求3所述的一种小麦矮杆基因Rht15紧密连锁的KASP标记在小麦上的应用，其特征在于：所述混合引物包括两条正向特异引物F-矮和F-高以及一条共用反向引物R，正向特异引物F-矮和F-高的浓度各为12mM毫摩尔/升，共用反向引物R的浓度为30mM毫摩尔/升。

6.根据权利要求4所述的一种小麦矮杆基因Rht15紧密连锁的KASP标记在小麦上的应用，其特征在于：所述PCR扩增的程序为：94℃预变性15min，94℃变性20s；61℃退火60s，每循环一次降0.6℃，10个循环；94℃变性20s，55℃退火60s，32个循环。

7.根据权利要求6所述的一种小麦矮杆基因Rht15紧密连锁的KASP标记在小麦上的应用，其特征在于：所述检测指PCR扩增反应后用酶标仪读取终端荧光读数，将数据导入软件进行基因分型；所用酶标仪的型号为FLUOstar Omega，基因分型的数据处理软件为KlusterCaller软件。

8.根据权利要求7所述的一种小麦矮杆基因Rht15紧密连锁的KASP标记在小麦上的应用，其特征在于：若基因分型的检测结果不明显，可通过至少3个补加循环后再进行基因分型，所述补加循环的程序为：94℃变性20s，57℃退火60s。