[发明专利]一种巴氏芽孢杆菌的菌种活性试验用灭菌方法

说明书

本申请涉及一种巴氏芽孢杆菌的菌种活性试验用灭菌方法，其包括以下步骤：S1.培养基器皿灭菌；S2.尿素溶液灭菌；S3.菌种启用，将安瓿瓶头端均匀灼烧，再在灼烧处滴上纯水使得安瓿瓶头端破裂，随后向安瓿瓶内注入纯水以形成悬浊菌液，继续灼烧安瓿瓶断口处外侧形成隔菌火幕；S4.菌种接种，将接种环置于隔菌火幕处灼烧至泛红，停止灼烧，待接种环冷却后蘸取悬浊菌液并转移至培养基中；S5.重复接种灭菌，接种环每次蘸取悬浊菌液完成后均需启用隔菌火幕，接种环接种完成后，经隔菌火幕灼烧灭菌后再蘸取悬浊菌液。本申请具有能有效避免外部其他菌种混杂在巴氏芽孢杆菌菌种中而影响巴氏芽孢杆菌菌种活性试验的试验结果的效果。

技术领域

本申请涉及菌种灭菌技术的技术领域，尤其是涉及一种巴氏芽孢杆菌的菌种活性试验用灭菌方法。

背景技术

微生物固化技术是通过大自然中微生物自身的水解过程以产生大量的高活性脲酶水解尿素，再与周围环境中的金属阳离子结合形成胶结物质，从而对土体起到加固作用。微生物固化技术通过产生的胶结物质对土壤的孔隙进行填充，以改善土体的物理力学特性，国内外研究学者多以巴氏芽孢杆菌(Sposcoscinapasteuri)进行微生物固化试验。其中巴氏芽孢杆菌是一种好氧的革兰氏阳性菌，能在新陈代谢过程中产生大量脲酶，可以利用巴氏芽孢杆菌催化尿素水解。

在利用巴氏芽孢杆菌催化尿素水解进行微生物固化过程之前，首先要培育出大量活性强的细菌。在菌种活化过程中，外部杂菌会影响巴氏芽孢杆菌的菌种活性，为防止环境中的其他菌种对巴氏芽孢杆菌产生污染，需要对培养巴氏芽孢杆菌过程中使用的器皿进行充分灭菌，尤其是在启用安瓿瓶内冻干粉状态的菌种以及通过接种环将菌种接种至培养基前，需要格外注意灭菌过程，目前在操作试验时主要还是以手动多频次操作为主，安瓿瓶内的菌种依然存在较大的感染其他菌种的风险。

发明内容

为了改善巴氏芽孢杆菌菌种在接种至培养基的过程中安瓿瓶内的菌种容易感染其他菌种的问题，本申请提供一种巴氏芽孢杆菌的菌种活性试验用灭菌方法。

本申请提供的一种巴氏芽孢杆菌的菌种活性试验用灭菌方法采用如下的技术方案：

一种巴氏芽孢杆菌的菌种活性试验用灭菌方法，包括以下步骤：

S1.培养基器皿灭菌，将菌种复苏所需的培养基、纯水、注射器、PE 管、无菌吸头、针头过滤器进行高温高压灭菌以及紫外灭菌；

S2.尿素溶液灭菌，通过灭菌后的针头过滤器在超净工作台上对尿素溶液进行过滤灭菌；

S3.菌种启用，将安瓿瓶头端均匀灼烧，再在灼烧处滴上纯水使得安瓿瓶头端破裂，随后向安瓿瓶内注入纯水以形成悬浊菌液，继续灼烧安瓿瓶断口处外侧形成隔菌火幕；

S4.菌种接种，将接种环置于隔菌火幕处灼烧至泛红，停止灼烧，待接种环冷却后蘸取悬浊菌液并转移至培养基中；

S5.重复接种灭菌，接种环每次蘸取悬浊菌液完成后均需启用隔菌火幕，接种环接种完成后，经隔菌火幕灼烧灭菌后再蘸取悬浊菌液。

更进一步地，所述步骤S3中启用菌种时，将安瓿瓶置于辅助灭菌设备上，所述辅助灭菌设备包括底座和固接于所述底座上的支架，所述支架上安装有用于定位安瓿瓶的定位架，所述定位架上端开口且呈倾斜状设置在所述支架上，所述定位架闭口端转动设置有用于吸附固定安瓿瓶的吸附件，所述定位架开口端设置有用于转动安瓿瓶的转动机构，所述底座上设置有出火口指向所述定位架开口方向的灼烧件。

更进一步地，所述吸附件包括转动安装在所述定位架闭口端上的转筒以及固接在所述转筒靠近所述定位架开口端一端的吸盘，所述吸盘中部穿设有滑动设置在所述转筒中的调气筒，所述调气筒靠近所述定位架的一端封闭且于该端侧壁开设有与其中空部连通的气孔，所述转筒中设置有用于将所述调气筒锁定在所述气孔被所述吸盘或所述转筒封堵状态的锁定组件。