[发明专利]细胞的应用、试剂盒、提高化学发光检测灵敏度的方法

说明书

本发明涉及生化检测技术领域，具体提供了细胞的应用、试剂盒、提高化学发光检测灵敏度的方法，本发明提供了细胞在提高化学发光检测灵敏度中的应用，与现有技术相比，本发明在化学发光检测中添加细胞能提高其灵敏度与稳定性。

技术领域

本发明涉及生化检测技术领域，更具体地说，涉及细胞的应用、试剂盒、提高化学发光检测灵敏度的方法。

背景技术

化学发光检测，主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理，利用仪器对体系化学发光强度的检测，从而确定待测物含量的一种痕量分析，在免疫分析中，使用化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，可用于抗原、抗体的痕量分析。在膜蛋白阵列技术中，需要将膜蛋白质粒通过瞬时转染的方式将质粒转染至工具细胞中，进而完成膜蛋白的表达，基于此形成膜蛋白的细胞阵列，然后在细胞阵列中加入待测蛋白进行免疫反应，最后通过免疫荧光、流式细胞术或化学发光的方法确认膜蛋白与待测蛋白是否存在特异的结合关系。

然而，在膜蛋白阵列(Membrane Proteome Array，MPA)实验中，由于在384孔板或1536孔板中完成膜蛋白的瞬时表达，存在细胞数量少、瞬时表达蛋白量较低的问题，导致免疫荧光、流式细胞术或化学发光的免疫检测技术的检测灵敏度、稳定性不能达到实验需求，尽管化学发光本身存在检测灵敏度较高的特点，但是应用到细胞的高通量筛选的检测中，仍然存在灵敏度和稳定性达不到高通量筛选的要求。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供细胞的应用、试剂盒、提高化学发光检测灵敏度的方法，以及将该方法或者试剂盒应用于膜蛋白阵列中，本发明在化学发光检测中添加细胞能提高其灵敏度与稳定性。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

细胞在提高化学发光检测灵敏度中的应用。

在本发明中，所述细胞为哺乳动物细胞，所述哺乳动物细胞包括CAKI-1 细胞、CFPEO细胞、DI-TNC1细胞、FADU细胞、HCAEC细胞、HCN-1A 细胞、HCS-2细胞、HUH-7细胞、LNCAP细胞、MEF细胞、MRC-5细胞、 PANC1细胞、VERO细胞、SK-N-MC细胞、SKNAS细胞、WERI-RB-1细胞、PC-12细胞、3LL细胞、293T细胞、Hep G2细胞、HELA细胞、CHO-K1 细胞、COS-1细胞、COS-7细胞、NIH3T3细胞、A204细胞、A549细胞、D-407 细胞、CHO细胞、HCS-2细胞、HT-29、U87细胞、Sf9细胞、HPAC细胞、 Jurkat细胞、KC细胞、P19细胞、WEHI-3细胞、BV-2细胞、CV-1细胞、JEG-3 细胞、M17细胞、UT-7细胞、SF-17细胞、Yac-1细胞、HCT-8细胞、HFF 细胞、HFTF细胞、HFSF细胞、A375、HKC细胞、HSF细胞、WISF细胞、 HK-2细胞、DU145细胞、3T3细胞、T84细胞、TF1细胞、THP1细胞、3T3L1 细胞、嗜铬细胞中的至少一种。

基质细胞为常用的贴壁细胞或悬浮细胞，作用主要为增加细胞密度，使得在细胞漂洗和弃上清的过程中能减少转染后阳性细胞的丢失，保留更多的阳性细胞进行免疫检测。

本发明中的一些具体实施例中，已证明293T细胞、CHO细胞、HPAC 细胞、Jurkat细胞在孵育抗体及不孵育抗体的情况下均可提高化学发光检测灵敏度。

在本发明中，所述细胞加入待检测细胞后需加入200μL PBS清洗两次再标记一抗，以减少背景干扰。进一步的，所述基质细胞加入量为1E5～1E6个/ 孔。

本发明提供的细胞可用于增加各类化学检测方法的灵敏度。

本发明还提供了一种用于化学发光检测的试剂盒，包括所述细胞。