[发明专利]一种肝素苄基酯酯化程度的检测方法

说明书

本发明公开了一种肝素苄基酯酯化程度的检测方法，其特征是采用以下步骤：a.采集肝素苄基酯的核磁数据；b.对核磁数据进行积分处理；c.计算苄基酯中苯环基团积分所占积分比例；d.根据积分比例评价肝素苄基酯的酯化程度。本发明方法，样品处理简单易行，样品上机分析时间短，适于酯化反应制备的肝素苄基酯的酯化程度进行快速、准确的测定，以评价该肝素苄基酯的酯化程度，为依诺肝素钠生产过程的中间体质量控制提供快速可靠的技术数据支持。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地说是一种用核磁采集肝素苄基酯谱图并积分分析其酯化程度的方法。

背景技术

依诺肝素钠是肝素钠经降解后制得的一种低分子肝素，因其出血副作用小、生物利用度高、体内半衰期长等特点，成为市场主要的抗凝药物。其制备工艺的主要步骤为碱降解肝素苄基酯，而肝素苄基酯的酯化程度则决定了碱降解的降解条件和依诺肝素钠成品的特征结构。

现有分析检测肝素苄基酯酯化程度的方法为专利《依诺肝素钠生产过程中肝素苄基酯的酯化率的检测方法》，CN103175925B，该方法先将肝素苄基酯在碱性环境中进行脱苄基反应生成苯甲醇，再用高效液相色谱仪分析反应液中苯甲醇的含量，通过苯甲醇的含量计算肝素苄基酯的酯化率，以此来评价肝素苄基酯的酯化程度。现有方法反应时间长、需对照组、准确度低、重复性差。本发明利用核磁共振波谱仪检测肝素苄基酯酯化程度的方法，精确性高、重复性好，能够大大提高降解工艺的稳定性和依诺肝素钠成品的质量。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有测定酯化率的方法周期长、准确度低、重复性差等问题，提供一种简便易行、稳定可靠，能有效分析肝素苄基酯酯化程度的方法。

为实行上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种肝素苄基酯酯化程度的检测方法，其特征是采用以下步骤：

a.采集肝素苄基酯的核磁谱图；

b.对核磁谱图进行积分处理；

c.计算苄基酯中苯环基团积分所占积分比例；

d.根据积分比例评价肝素苄基酯的酯化程度。

X ×100%

X：苄基酯中苯环基团积分所占积分比例

∫x：苄基酯中苯环基团积分

∫s：各段积分总和

根据所述的分析检测肝素苄基酯酯化程度的方法，其特征是采用以下步骤：

优选地，所述肝素苄基酯配制为浓度为0.05mg/μL~0.20mg/μL的肝素苄基酯氘代水溶液；优选地，所述核磁谱图采用核磁共振氢谱；优选地，核磁共振氢谱采集参数设置，采样点数（TD）为65536，扫描次数（NS）为16，谱宽（SW）为20ppm，采样温度为298K；

对采集所得氢谱进行分段积分，优选地，分段化学位移自低场依次为8.00-6.99、6.00-4.97、4.62-4.08、4.07-3.51、3.51-3.05、2.32-1.87、1.40-1.11；

所述化学位移8.00-6.99段为苄基酯中苯环基团特征氢谱，计算此段氢谱积分所占各段积分总和比例。

从结构式（见图5）分析，肝素苄基酯为肝素钠与苄基酯化连接而成，不同酯化程度肝素苄基酯，苄基含量会呈现差异，在肝素苄基酯核磁谱图中明显表现为苯环氢含量差异，以此反映酯化程度。

本发明方法，样品处理简单易行，样品上机分析时间短，适于酯化反应制备的肝素苄基酯的酯化程度进行快速、准确的测定，以评价该肝素苄基酯的酯化程度，为依诺肝素钠生产过程的中间体质量控制提供快速可靠的技术数据支持。

附图说明

图1 实施例一氢谱图；

图2 实施例二氢谱图；

图3 实施例三氢谱图；

图4 实施例四氢谱图；