[发明专利]靶向并广谱杀伤肿瘤细胞的DC细胞及其制备方法与应用

说明书

本发明提供了一种靶向并广谱杀伤肿瘤细胞的DC细胞及其制备方法与应用。本发明首先提供一种高表达CD40L的DC细胞，本发明还提供了同时高表达TRAIL和CD40L的DC细胞。本发明的表达TRAIL及CD40L细胞因子的DC细胞，可加强对肿瘤细胞的识别，通过DC表面的TRAIL作用于肿瘤细胞的死亡受体，从而诱导癌细胞的凋亡。

技术领域

本发明属于细胞免疫治疗领域，具体而言，是关于一种靶向并广谱杀伤肿瘤细胞的DC细胞、其制备方法及相关应用。

背景技术

DC细胞是功能最强的专职抗原呈递细胞，是T细胞特异免疫应答的启动者和调控者。其最大的特点是能刺激幼稚和记忆性T淋巴细胞活化和增殖为抗原特异性的细胞毒性效应T细胞(CTL)，并能分泌如IL2、INF-γ等细胞因子发挥免疫调节作用，参与机体对疾病的免疫应答。DC-CTL治疗已广泛用于临床治疗，并且取得较为理想的效果。但是，运用DC细胞直接靶向并杀死肿瘤细胞的研究目前还鲜见报道。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种可以直接靶向并杀死肿瘤细胞的DC细胞。

本发明的另一目的在于提供所述DC细胞的制备方法。

本发明的另一目的在于提供所述DC细胞的相关应用。

本案发明首先提供了TRAIL、CD40L质粒，制备慢病毒，转染树突状细胞或者肿瘤细胞，即分别得到高表达TRAIL和同时高表达TRAIL、CD40L的DC细胞，分别命名为BJ4.2C和BJ4.2E。本发明进一步将负载这些分子的DC细胞与表达CD40的肿瘤细胞共培养，通过杀伤实验检测此类DC细胞对肿瘤细胞的毒性。DC细胞通过表达CD40L加强对肿瘤细胞的识别，通过DC表面的TRAIL作用于肿瘤细胞的死亡受体，从而诱导癌细胞的凋亡。

一方面，本发明提供了一种可以直接靶向并杀死肿瘤细胞的DC细胞，其相比于常规DC细胞，高表达CD40L和/或TRAIL。

CD40L是CD40的配体，主要表达于T细胞上，二者相互作用是T细胞与DC细胞之间非常关键的共刺激信号。CD40是肿瘤坏死因子(TNF)/TNF受体(TNFR)家族成员之一，在生理条件下，CD40主要表达在各种抗原呈递细胞(APCs)的细胞膜上，包括树突状细胞(DCs)、B细胞和单核细胞-巨噬细胞。近年来的研究表明，CD40在多种肿瘤细胞的胞膜上高表达，例如在恶性淋巴瘤、鼻咽癌、肝癌、结肠癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、黑色素瘤、卵巢癌、嗜骨瘤等，而在正常的成熟组织中其表达则非常弱甚至阴性。这些证据提示，CD40也许是一个潜在的肿瘤治疗靶点。

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体TRAIL，是肿瘤坏死因子超家族成员之一，通过与肿瘤细胞上的死亡受体如DR4或DR5结合后，介导肿瘤细胞的凋亡，而对正常细胞没有毒性。研究表明，TRAIL及其受体都是有潜力的抗癌靶标，重组可溶性TRAIL蛋白以及抗DR5等激活性抗体的研究也正在开展中。但是，数据表明，可溶性TRAIL在动物体内的半衰期较短，会在肾脏被快速代谢清除，导致其生物利用度低。而完整的TRAIL跨膜蛋白，其生物活化远超重组可溶性TRAIL。临床上需要开发新的可以运载TRAIL的递送系统，使其可以高效靶向肿瘤组织，发挥抗肿瘤作用。

本发明中，将CD40L、TRAIL负载到DC细胞上，可实现：一方面，CD40表达于肿瘤细胞膜上，由此本发明的DC细胞可以通过表达CD40L加强对肿瘤细胞的识别，靶向肿瘤组织；另一方面，TRAIL表达于DC细胞膜上，使得DC细胞可直接杀伤肿瘤细胞，随后裂解的肿瘤细胞可释放癌抗原，被内源性DC细胞摄取，随之而来引发内源性DC细胞激活的级联放大效应，因此，本发明可发展为一种精准、高效的新的免疫细胞疗法。

具体而言，一方面，本发明提供了一种高表达CD40L的DC细胞。

根据本发明的具体实施方案，本发明的高表达CD40L的DC细胞，还高表达TRAIL。即，本发明提供了一种同时高表达CD40L和TRAIL的DC细胞。