[发明专利]一种通过伊文思蓝染料检测糖原的方法

说明书

本发明适用于糖原检测技术领域，提供了一种通过伊文思蓝染料检测糖原的方法，包括以下步骤：步骤（1）配置一定量的伊文思蓝母液以及糖原母液；步骤（2）取比色皿，在比色皿中加入一定浓度的糖原母液，然后加入一定浓度的伊文思蓝母液，在室温下加水构成1mL检测体系；步骤（3）在荧光光谱仪中测试其荧光强度。本发明提供的一种通过伊文思蓝染料检测糖原的方法，相对于传统的检测方法，伊文思蓝染料检测糖原快速简单、成本低廉，并且在复杂环境下也能实现对糖原的检测。

技术领域

本发明属于糖原检测技术领域，尤其涉及一种通过伊文思蓝染料检测糖原的方法。

背景技术

糖原是一种高度支化的多糖，存在于大多数生物体中，是细胞能量机制的重要组成部分。当糖原的储存或者降解受到影响，会引起有关糖原的储存疾病(GSDs)，损害人们的身体健康。针对出现各种糖原的相关疾病，出现了越来越多的糖原检测手段。

目前有关糖原检测的方法：(1)电镜法：各种组织和细胞均可以使用电镜法观察糖原颗粒。电镜检查对糖原累积症的诊断与鉴别具有的重要临床价值，但是此方法步骤繁琐，消耗时间长，对操作者要求高。(2)荧光测定法：淀粉葡萄糖苷酶将脑糖原的糖苷键水解成葡萄糖，分别测出二者的差值即为糖原分解得到的葡萄糖，通过检测葡萄糖来间接定量糖原的含量，但是此方法影响了结果的精确度。(3)试剂盒法：糖原在浓碱溶液中比较稳定，在显色前将组织放入浓碱中加热，其他成分被破坏而糖原能够保留。然而这种方法前期准备工作较多，并且不能直接测定糖原的含量。(4)免疫组化法：利用抗原抗体特异性结合的原理测出荧光强度从而计算出糖原的含量，但是由于抗体并未商品化，而且价格昂贵，大大的限制了其应用。(5)PAS(Periodic Acid Schiff)：过碘酸把糖类相邻两个碳上的羟基氧化成醛基，再用Schiff试剂和醛基反应使呈现紫红色。主要用来检测组织学上的糖类。虽然它是应用最广泛的，但是它的特异性不高，而且步骤十分繁琐。

因此，市面上被开发出来的检测糖原的方法都存在一些不可忽略的缺点，比如直接测定糖原的方法价格昂贵，成本较高，而间接法测定糖原会导致测试结果精度不够，并且需要对糖原进行前期的预处理，此过程步骤繁琐，耗费时间。

因此我们需要提供一种快速、耗时短并且能够特异性识别糖原的一种新方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种通过伊文思蓝染料检测糖原的方法，旨在解决市面上被开发出来的检测糖原的方法都存在价格昂贵，成本较高或者测试过程步骤繁琐，耗费时间的问题。

本发明是这样实现的，一种通过伊文思蓝染料检测糖原的方法，包括以下步骤：

步骤(1)：配置一定量的伊文思蓝母液以及糖原母液；

步骤(2)：取比色皿，在比色皿中加入一定浓度的糖原母液，然后加入一定浓度的伊文思蓝母液，在室温下加水构成1mL检测体系；

步骤(3)：在荧光光谱仪中测试其荧光强度。

进一步的技术方案，在步骤(2)中，伊文思蓝母液与糖原母液的浓度比为1：200。

进一步的技术方案，在步骤(3)中，加水后，用搅拌器将混合溶液搅拌均匀。

进一步的技术方案，所述糖原母液为兔肝糖原、牡蛎糖原和牛肝糖原。

相较于现有技术，本发明的有益效果如下：

本发明提供的一种通过伊文思蓝染料检测糖原的方法，相对于传统的检测方法，伊文思蓝染料检测糖原快速简单、成本低廉，并且在复杂环境下也能实现对糖原的检测。

附图说明

图1为实施例1中伊文思蓝(EB)对不同浓度兔肝糖原的荧光响应；图2和图3为实施例1中EB对不同浓度的牡蛎糖原和牛肝糖原的荧光响应。图1-3的激发波长均为600nm，发射波长均为为675nm。