[发明专利]实现高着床潜能囊胚筛选的标志物及其应用

说明书

本发明公开了一种着床潜能囊胚筛选的标志物及其应用，属于辅助生殖技术领域，所述标志物包括基因PET100或其表达产物和基因RAB25或其表达产物。本发明基于已构建的高着床潜能模型，在重新选择的独立样本中，通过对高着床潜能胚胎的成功筛选，证明本研究构建的着床潜能预测标志物在临床应用中真实有效。

技术领域

本发明属于辅助生殖技术领域，具体涉及一种实现高着床潜能囊胚筛选的标志物及其应用。

背景技术

辅助生殖技术(Assisted Reproductive Technology，ART)作为治疗不孕症的有效方法，已帮助众多不孕夫妇成功获得后代。促排卵方案、体外受精技术以及胚胎培养系统等关键技术持续优化更新，但是ART总体成功率仍仅为30-40％左右。挑选发育潜能好的胚胎移植将缩短ART周期、提高临床妊娠率。

在辅助生殖的临床过程中，还没有单一的标准可以确保筛选到具着床潜能的胚胎。胚胎形态学检查和胚胎植入前遗传学检测(Preimplantation Genetic Testing，PGT)是目前评估胚胎着床及发育潜能的常用手段。胚胎着床前非整倍体检测(PreimplantationGenetic Testing for Aneuploidy，PGT-A)主要通过基因组测序或基因组杂交芯片检测胚胎染色体数目，通过PGT-A挑选染色体数目正常的整倍体胚胎；胚胎着床前染色体结构变异检测(Preimplantation Genetic Testing for Chromosomal StructuralRearrangements，PGT-SR)能够区分染色体数目和结构是否正常；同时可通过胚胎着床前单基因病检测(Preimplantation Genetic Testing for Monogenic Diseases，PGT-M)帮助选择优质胚胎，避免遗传病患儿出生。经过形态学和PGT筛选的胚胎，移植后着床失败率仍然高达30％-50％。因此，高着床潜能胚胎的筛选仍旧是临床面临的重要问题。

中国专利申请CN105861658A(对应文章Li G,Yu Y,Fan Y,et al.Genome wideabnormal DNA methylome of human blastocyst in assisted reproductivetechnology[J].Journal of Genetics and Genomics,2017,44(10):475-481.)公开了一种通过囊胚甲基化水平和加纳德形态囊胚分级筛选发育优良囊胚的方法。基于加德纳形态囊胚分级系统对不同等级囊胚进行甲基化测序，建立高形态等级(AA)、中形态等级(AB、BA或BB)和低形态等级(CC、BC或CB)囊胚DNA甲基化模型；对应滋养层的甲基化状态与囊胚的形态分级相关。该方法利用少量囊胚活检滋养层细胞的甲基化数据来预测整个囊胚甲基化水平、检测囊胚的非整倍性，通过滋养层的甲基化水平与形态学评级为AA的优良囊胚甲基化水平的接近程度预测胚胎发育潜能。该专利申请根据加德纳形态囊胚分级系统，将AA级胚胎的甲基化水平作为标准参考，但是部分AB、BA、BB级胚胎仍具发育潜能，临床上部分夫妇往往得不到AA级胚胎，此方法浪费和丢弃了部分仍具发育潜能的胚胎。

中国专利申请CN114480629A公开了一种同时实现囊胚非整倍体检测和高着床潜能筛选的方法。该方法通过囊胚活检得到的滋养层细胞的甲基化数据检测全基因组的拷贝数变异、预测囊胚移植后着床潜能。该方法纳入了12例临床中真实的囊胚移植后妊娠结局，使预测模型更准确。该专利申请通过甲基化水平实现囊胚非整倍体检测和高着床潜能胚胎筛选，但是临床上染色体倍性正常的胚胎仍然会出现发育异常或移植后妊娠失败的情况。针对由于转录异常而非基因结构异常导致的发育失败的情况，该筛选方法不适用。