[发明专利]特异性检测、鉴别检测鼠李糖乳杆菌的引物探针及其应用

说明书

本发明属于DNA分子检测技术领域，涉及一种特异性检测、鉴别检测鼠李糖乳杆菌的引物探针及其应用。一种检测鼠李糖乳杆菌的引物组，其特征在于，包含四组引物对，所述引物对序列分别如序列表SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.8所示。本发明所提供的技术方案可实现从复杂样本中快速、特异性地检测出鼠李糖乳杆菌，大大缩短了检测时间，提高检测效率。

技术领域

本发明属于DNA分子检测技术领域，涉及一种特异性检测、鉴别检测鼠李糖乳杆菌的引物探针及其应用。

背景技术

鼠李糖乳杆菌( Lactobacillus rhamnosus)多存在于人和动物的肠道内，细菌分类学属于乳杆菌属，鼠李糖亚种，是厌氧耐酸、不产芽孢的一种革兰氏阳性益生菌。鼠李糖乳杆菌在人类肠道环境中定殖和繁殖后，通过依附于宿主的肠上皮细胞，能够成为肠道粘膜的一层生物屏障，从而达到提升宿主肠道粘膜屏障能力，进而达到改善宿主消化道系统功能的目的。同时，鼠李糖乳杆菌也是一种无毒、无副作用的益生菌，其功能特性主要有调节肠道菌群、预防和治疗腹泻、毒素的排出和提升机体免疫力，具有较高的应用价值，符合现代人类健康保健的基本需求。鼠李糖乳杆菌的优良的功能特性使得鼠李糖乳杆菌可以添加到发酵乳制品中，结合食品科学，具有极高的应用价值和发展前景。

目前常用实时荧光定量PCR、荧光原位杂交、免疫磁珠电化学传感器等方法检测鼠李糖乳杆菌，上述方法均存在检测周期较长、实验过程要求高、检测误差大等缺陷。

发明内容

本发明针对传统鼠李糖乳杆菌检出过程中比对方法实验周期长、检测不准确等问题提出一种新型的特异性检测、鉴别检测鼠李糖乳杆菌的引物探针及其应用。

为了达到上述目的，本发明是采用下述的技术方案实现的：

ERIC-PCR是通过PCR扩增，获得目的菌株的ERIC指纹图谱片段进行比对分析，ERIC序列具有高度保守性，根据ERIC片段设计引物探针，构建快速且便捷的分子分型检测平台，可在复杂的基因组环境中快速检测目的菌株；ERIC-PCR技术是目前研究胃肠道菌群结构多样性与种群结构复杂性的较为普遍的一种分子生物学方法。本发明设计的四对引物探针可用于科学研究、畜牧养殖等领域，快速高效检验鼠李糖乳杆菌的存在，为鼠李糖乳杆菌的检出提供一种便捷、快速的方法。

从鼠李糖乳杆菌中提取全基因组DNA，对四条目的片段进行回收，并将ERIC目的片段连接T载体测序，设计四对引物探针，验证设计引物，验证引物探针特异性、普适性及检测限度。具体步骤如下：

1. 提取鼠李糖乳杆菌全基因组DNA。

2. 根据四因素三水平正交实验找到鼠李糖乳杆菌基因组DNA的ERIC-PCR最佳扩增条件，进行鼠李糖乳杆菌基因组DNA的ERIC多态性扩增。

3. 对鼠李糖乳杆菌ERIC基因片段进行回收、纯化。

4. 将胶回收片段连接T载体，测序及基因比对分析。

5. 设计四对特异性引物探针，通过普通PCR验证设计的引物探针。

6. 将混合样本采用引物探针进行PCR反应，通过普通PCR验证引物探针特异性、普适性、检测限度及市场应用潜力。