[发明专利]一种用于级联递送药物的透明质酸纳米给药系统的制备方法

说明书

本发明公开了一种用于级联递送药物的透明质酸纳米给药系统的制备方法，以透明质酸为载体，化学连接阿霉素前药和一氧化氮前药，制备前药聚糖(HA‑DOX‑JS‑K)，前药聚糖自组装成粒径为100nm的纳米药物，以降低药物输送过程中的泄露；到达肿瘤组织后，在肿瘤酸性微环境和高谷胱甘肽刺激下释放药物阿霉素，同时在谷胱甘肽/谷胱甘肽转移酶响应下释放一氧化氮，一氧化氮介导胶原降解，增强纳米粒子在实体瘤中渗透；透明质酸载体可通过CD44受体主动靶向肿瘤细胞，增加肿瘤细胞对纳米药物的摄取。本发明采用上述一种用于级联递送药物的透明质酸纳米给药系统的制备方法，通过两步级联递送，极大提高了纳米粒子在实体肿瘤细胞的累积，提高了纳米药物的递送效率。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其是涉及一种用于级联递送药物的透明质酸纳米给药系统的制备方法。

背景技术

尺寸从100到200纳米不等的数十种抗癌纳米药物，已经被批准用于临床应用或临床试验。然而，许多证据表明，纳米药物虽然可以提高药物的生物安全性，但与小分子药物制剂相比，却无法提高疗效。

纳米药物抗肿瘤效率低下的主要原因是肿瘤组织固有的病理屏障对纳米药物从表层肿瘤向深层肿瘤的扩散构成了巨大的挑战，抗肿瘤药物不能充分内化到深层肿瘤，导致疗效不理想。因此，要解决纳米药物传递效率低下的问题，必须克服一系列不利的生物障碍，特别是肿瘤组织中密集的细胞外基质和纳米药物的非靶向性肿瘤摄取。

肿瘤微环境中的细胞外基质(ECM)，尤其是致密胶原，是将纳米颗粒递送至肿瘤的第一道屏障。肿瘤组织中紧密的胶原可以提高间质流体压力，阻止纳米颗粒的深度渗透。内源性分子一氧化氮(NO)是一种自由基，可与超氧阴离子反应形成更强大的氧化剂过氧亚硝酸盐(RNS)，以促进胶原降解，有望有效提高纳米药物在肿瘤部位的渗透性。

此外，肿瘤细胞对纳米药物的低摄取是药物递送的第二个障碍。主动靶向策略可以通过纳米颗粒上的配体和肿瘤细胞上的受体之间的特异性识别来增强药物递送系统的肿瘤摄取。CD44是各种癌细胞膜上的特异性受体，与透明质酸(HA)有很强的亲和力，保证了纳米颗粒的肿瘤吸收效率。因此，为了最终提高纳米颗粒的内化效率，结合肿瘤组织的深度渗透和增强肿瘤细胞对纳米颗粒的吸收的策略将能提高抗肿瘤治疗疗效。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于级联递送药物的透明质酸纳米给药系统的制备方法，解决了上述背景技术中纳米药物输送效率低下的问题。

为实现上述目的，本发明提供了一种用于级联递送药物的透明质酸纳米给药系统的制备方法，包括如下步骤：

S1、顺式乌头酸酐-阿霉素(CAD)的制备：将盐酸阿霉素溶于去离子水中并冰浴，将顺式乌头酸酐溶于1,4-二氧六环中，并在搅拌情况下将其缓慢加入盐酸阿霉素溶液中，然后缓慢加入浓度0.1～1M的氢氧化钠溶液；调节上述混合溶液的pH值至8.5～9.0，之后冰浴15～30min，再将pH值调整到7.0并搅拌20～40min，在室温下反应24小时后，向混合溶液中缓慢加入浓度为0.5～1.5M的冰盐酸，直到出现重沉淀，将混合物在冰上静置0.5～2h后10000rpm离心8～15min，收集沉淀并冻干，得到顺式乌头酸酐-阿霉素；

S2、一氧化氮前药(alkynyl-JS-K)的制备：将JS-K{O₂-(2,4-dinitropheny l)-1-[(4-ethoxycarbonyl)piperazin-1-yl]diazen-1-ium-1,2-diolate}加入二氯甲烷中搅拌形成悬浊液，冰浴使悬浊液温度降至0℃后加入三乙醇胺，并搅拌至固体完全溶解，保持0℃条件下缓慢加入氯甲酸丙炔酸酯，冰浴搅拌反应1～2h至反应完全，得到反应液；向上述反应液中加入二氯甲烷稀释，然后用10％柠檬酸洗，水相用二氯甲烷提取一次后合并有机相，无水Na₂SO₄干燥、过滤、旋蒸得粗品，粗品柱纯化得淡黄色固体产物alkynyl-JS-K；