[发明专利]一种引物对在鉴定甜瓜叶形中的应用

说明书

本发明公开一种引物对在鉴定甜瓜叶形中的应用，属于鉴定甜瓜叶形技术领域。为了更快捷和准确地在甜瓜苗期鉴定叶形。一种引物对在鉴定甜瓜叶形中的应用，所述引物对为核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的下游引物，通过分子标记辅助选择的方法，在甜瓜苗期即可对叶形进行分子标记辅助选择，提高了筛选的准确性和效率，具有重要的理论和实践意义。

技术领域

本发明属于鉴定甜瓜的叶形的表型的技术领域，具体涉及一种引物对在鉴定甜瓜的叶形的表型中的应用。

背景技术

甜瓜(Cucumis melo L.)是重要的葫芦科经济作物，在我国及世界范围内广泛栽培。甜瓜叶形具有十分丰富的变异，主要包括：圆叶、裂叶、掌状叶等，叶片形态建成直接影响植株的光合作用，是甜瓜栽培生产过程中的重要性状。申请人前期研究发现，在圆叶和裂叶遗传背景下，甜瓜圆叶性状为单隐性遗传，在此基础之上，利用基因组重测序、BSA-seq技术获得与甜瓜圆叶性状紧密连锁的染色体区段，在区段内开发分子标记，在自然群体中进行验证，开发与甜瓜圆叶性状紧密连锁的分子标记，应用圆叶甜瓜材料苗期筛选。

目前筛选圆叶甜瓜的方式主要是待植株定植并生长一段时间后，采用肉眼观测的方式进行鉴定，耗时费力，且不同人员的鉴定标准存在明显差异，严重影响了叶形鉴定的准确性。甜瓜的苗期指的是子叶期或者长出叶子的早期，还看不出来叶片形状的时候，所以在苗期的甜瓜是通过肉眼看不出来叶片的性状。亟需一种科学的在甜瓜苗期鉴定叶片性状的方法。

发明内容

本发明的目的是为了更快捷和准确地在甜瓜苗期对其叶片形状进行鉴定。

本发明提供一种引物对在鉴定甜瓜叶形鉴定中的应用，所述引物对为核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的下游引物。

进一步地限定，所述叶形为圆叶或裂叶性状。

本发明提供一种鉴定甜瓜叶形的方法，所述方法如下：

步骤1：提取待测甜瓜叶片的基因组DNA；

步骤2：以步骤1获得的基因组DNA为模板，利用引物对进行PCR扩增，获得PCR产物；所述引物对包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的下游引物；

步骤3：用限制性内切酶对步骤2获得的PCR产物进行酶切，获得酶切产物；

步骤4：通过检测酶切产物，判断甜瓜叶形。

进一步地限定，步骤3中所述的内切酶为MspI。

进一步地限定，步骤4中检测的酶切产物不具有608bp片段则表现为裂叶性状，具有 608bp片段则表现为圆叶性状。

本发明提供一种鉴定甜瓜叶形的试剂盒，所述试剂盒含有SEQ ID NO.3所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的下游引物。

进一步地限定，所述试剂盒还包括限制性内切酶MspI。

本发明提供一种与甜瓜圆叶性状紧密连锁的分子标记，所述分子标记为SEQ IDNO.1 所示，第422位的碱基为A或G。

本发明提供上述的试剂盒、上述的分子标记或SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的引物对或在鉴定甜瓜的叶形的表型中的应用。

本发明提供上述的试剂盒、上述的分子标记或SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的引物对在甜瓜叶形辅助鉴定、辅助育种及甜瓜叶形筛选中的应用。