[发明专利]一种多酶催化制备高纯度胆固醇的方法

权利要求书

1.一种多酶催化制备高纯度胆固醇的方法，其特征在于，包括以下步骤：

第一步为原料式(II)与对甲苯磺酰氯反应，在二氯甲烷、三乙胺和4-二甲氨基吡啶催化条件下磺酰化得中间体1；

中间体1再通过第一制备线路或第二制备线路制备胆固醇；

第一制备线路为：中间体1先与由溴代异戊烷制备的偶联试剂，在铜锂试剂催化下偶联反应得到中间体2；中间体2再与醋酐发生酯化反应，得到中间体3；最后中间体3在酯水解酶、3β-类固醇脱氢酶、葡萄糖脱氢酶和NAD+催化作用下，发生酯水解和酮基还原反应，得到胆固醇式(I)；

第二制备线路为：中间体1先与醋酐发生酯化反应，得到中间体4；中间体4再在酯水解酶、3β-类固醇脱氢酶、葡萄糖脱氢酶和NAD+催化作用下，发生酯水解和酮基还原反应，得到中间体5；最后中间体5与由溴代异戊烷制备的偶联试剂，在铜锂试剂催化下偶联反应，得到胆固醇式(I)。

2.根据权利要求1所述的多酶催化制备高纯度胆固醇的方法，其特征在于，第一步中：

先是在室温条件下，向反应容器加入化合物式(II)、4-二甲氨基吡啶、三乙胺和二氯甲烷，并进行氮气置换；再升温至35～40℃加入对甲苯磺酰氯回流反应1～2小时；然后对应完的溶液进行精制得到中间体1。

3.根据权利要求2所述的多酶催化制备高纯度胆固醇的方法，其特征在于，所述精制得到中间体1的过程包括：

先将反应完的溶液降温至0～30℃，滴加甲醇水溶液搅拌分层并进行第一次分液；在第一次分液的水相中加入二氯甲烷萃取并进行第二次分液，再将第一次分液的有机层与第二次分液的有机层合并，合并后的有机层加入氯化钠溶液搅拌一段时间分层并进行第三次分液，第三次分液的有机层减压浓缩至稠状，加入甲醇减压浓缩置换，降温至10～30度搅拌0.5～1小时，过滤，滤饼用甲醇洗涤，将洗涤后的滤饼装盘于50℃以下烘料，烘至干燥得中间体1；减压浓缩的温度为40～50℃；所述甲醇水溶液中的甲醇:水为1:1～3。

4.根据权利要求1所述的多酶催化制备高纯度胆固醇的方法，其特征在于，所述铜锂试剂为四氯铜酸锂溶液；

所述四氯铜酸锂溶液的制备过程为：在室温条件下，向反应容器加入氯化铜、氯化锂和四氢呋喃，控制温度在10～30℃反应1～2小时至溶清；

所述由溴代异戊烷制备的偶联试剂的制备过程为：在室温条件下，向反应容器加入镁屑、溴代异戊烷和四氢呋喃，缓慢升温至30～42℃反应1～5小时，得到由溴代异戊烷制备的偶联试剂。

5.根据权利要求1所述的多酶催化制备高纯度胆固醇的方法，其特征在于，所述第一制备线路中，得到中间体2的反应如下：

由溴代异戊烷制备的偶联试剂降温至-20～-10℃，控温滴加四氯铜酸锂溶液；反应1小时后，滴加中间体1的四氢呋喃溶液，滴加完毕后，缓慢升温至0～10℃，反应10～30小时，控温在0～20℃，加入盐酸淬灭，再对盐酸淬灭后的溶液精制得中间体2；

所述第二制备线路中，得到胆固醇的反应如下：

由溴代异戊烷制备的偶联试剂降温至-30～-20℃，控温滴加四氯铜酸锂溶液；反应1小时后，滴加中间体5的四氢呋喃溶液，滴加完毕后，缓慢升温至0～10℃，反应10～30小时，控温在0～20℃，加入盐酸淬灭，再对盐酸淬灭后的溶液精制得胆固醇。