[发明专利]一种新型单分子酶电化学酚类传感器及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种新型单分子酶电化学酚类传感器，其特征在于，所述的传感器包括电极基底，以及在电极基底表面上依次组装的金纳米颗粒层、基础蛋白和胆红素氧化酶；所述的基础蛋白通过带巯基的羧酸或胺类化合物以共价连接方式结合到金纳米颗粒表面上，所述的胆红素氧化酶以共价连接方式结合到基础蛋白上。

2.根据权利要求1所述的新型单分子酶电化学酚类传感器，其特征在于，所述的电极基底的材质为金、铂、玻碳或者石墨。

3.根据权利要求1所述的新型单分子酶电化学酚类传感器，其特征在于，所述的基础蛋白为多血红素细胞色素c、铁硫蛋白或牛血清蛋白。

4.一种制备权利要求1-3任一项所述的新型单分子酶电化学酚类传感器的方法，其特征在于，包括以下步骤：在导电、惰性的固体分析电极表面上沉积金纳米颗粒；然后借助带巯基的羧酸或胺类化合物在金纳米颗粒表面上修饰自组装单层；借助自组装单层以共价连接的方式将基础蛋白固定到金纳米颗粒表面上，在电极表面得到单分子层的基础蛋白；将胆红素氧化酶共价连接到基础蛋白上，制得单分子酶电化学酚类传感器。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)在三电极电化学体系中，以导电、惰性的固体分析电极为工作电极、铂丝为对电极、银/氯化银为参比电极，将电极共同浸没于含有氯金酸的电沉积液中，以循环伏安法将氯金酸根还原，使金纳米颗粒沉积在工作电极表面上；

(2)将沉积金纳米颗粒的工作电极浸没在羧基化修饰液中6～48h，得到表面羧基化的纳米金颗粒电极；

(3)将表面羧基化的纳米金颗粒电极用EDC-NHS溶液进行处理，经水漂洗后，浸泡于基础蛋白溶液中，使基础蛋白共价固定到金纳米颗粒表面上，再用EDC-NHS溶液进行处理，经水漂洗后，浸泡于胆红素氧化酶溶液中，制得单分子酶电化学传感器。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的电沉积液的组成为：1mM氯金酸，50mM硫酸钠，0.5M硫酸，溶剂为水；所述的循环伏安法的电势范围是-1.4V～+0.6V，扫描速率是10～200mV/s，扫描循环数是5～20。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的羧基化修饰液的组成为：β-巯基乙醇9mM，巯基乙酸1mM，溶剂为水。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的EDC-NHS溶液的组成为：0.1M EDC，0.5M Sulfo-NHS，0.1M吗啉乙磺酸，溶剂为水。

9.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的基础蛋白为多血红素细胞色素c、铁硫蛋白或牛血清蛋白；所述的基础蛋白溶液的浓度为1μM，所述的胆红素氧化酶溶液的浓度为740U BOD/mL PBS缓冲液。

10.权利要求1-3任一项所述的新型单分子酶电化学酚类传感器在检测酚类污染物中的应用。