[发明专利]一种草地贪夜蛾乙酰胆碱酯酶A201S和F290V突变检测方法及应用

权利要求书

1.一种基于环介导等温扩增技术（LAMP）对草地贪夜蛾乙酰胆碱酯酶A201S和F290V突变检测的引物组合，其特征在于，

所述引物组合包括内引物FIP/BIP和外引物F3/B3，所述内引物FIP/BIP序列分别为:

FIP-A201S：TCGATAGAGGTGACAATAAATGCAAAACATTATTCGGTGAGTCGT（SEQ ID NO.1）

BIP-A201S： AACTTGTTCTCTCAGGCGATAATGTCAAAATGCTTTCTTCTCTTGA（SEQ ID NO.2）

FIP-F290V：GCTCATCTAGGAACGAACCATCTAGGAACTCTTGGTATTTGTGAAG（SEQ ID NO.5）

BIP-F290V：TACCCGCTCGATCATTAGCAGTAGTAACCTTCCTCCGTATT（SEQ ID NO.6）

所述外引物F3/B3序列分别为:

F3-A201S：TACTTCGGAGGAAACCCG（SEQ ID NO.3）

B3-A201S：TTCTGCTAATCGGATGCC（SEQ ID NO.4）

F3-F290V：GATGAACTAGTCAATAATGAATGG（SEQ ID NO.7）

B3-F290V：CCTTGGGGAATAACTCAGT（SEQ ID NO.8）。

2.一种基于环介导等温扩增技术（LAMP）对草地贪夜蛾乙酰胆碱酯酶A201S和F290V突变检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）提取草地贪夜蛾幼虫或成虫基因组DNA，制备gDNA模板；

（2）在反应容器中建立LAMP反应体系，包括LAMP反应液、特异性引物，gDNA模板，并补充无菌水；

（3）将LAMP反应体系放入恒温容器中进行恒温孵育反应；

（4）结果判定：反应结束后，反应液不变色的样品为非突变体，反应液变色的样品为突变体；

其中所述特异性引物包括内引物FIP/BIP和外引物F3/B3，所述内引物FIP/BIP序列分别为:

FIP-A201S：TCGATAGAGGTGACAATAAATGCAAAACATTATTCGGTGAGTCGT（SEQ ID NO.1）

BIP-A201S： AACTTGTTCTCTCAGGCGATAATGTCAAAATGCTTTCTTCTCTTGA（SEQ ID NO.2）

FIP-F290V：GCTCATCTAGGAACGAACCATCTAGGAACTCTTGGTATTTGTGAAG（SEQ ID NO.5）

BIP-F290V：TACCCGCTCGATCATTAGCAGTAGTAACCTTCCTCCGTATT（SEQ ID NO.6）

所述外引物F3/B3序列分别为:

F3-A201S：TACTTCGGAGGAAACCCG（SEQ ID NO.3）

B3-A201S：TTCTGCTAATCGGATGCC（SEQ ID NO.4）

F3-F290V：GATGAACTAGTCAATAATGAATGG（SEQ ID NO.7）

B3-F290V：CCTTGGGGAATAACTCAGT（SEQ ID NO.8）。

3.根据权利要求2所述的草地贪夜蛾乙酰胆碱酯酶A201S和F290V突变检测方法，其特征在于，步骤（2）中，所述LAMP反应液包括2WarmStart LAMP预混液。

4.根据权利要求3所述的草地贪夜蛾乙酰胆碱酯酶A201S和F290V突变体检测方法，其特征在于，所述LAMP反应体系包括LAMP反应液包括2WarmStart LAMP预混液试剂 12.5 μL、gDNA模板1.0 μL、内引物FIP/BIP和外引物F3/B3混合液2.5 μL、用无菌水补足25 μL反应体系。