[发明专利]一种铁皮石斛种子贮存方法

说明书

本发明涉及种子保存技术领域，具体是一种铁皮石斛种子贮存方法，本发明不需要用液氮冷冻，通过将消毒后的铁皮石斛种子用干燥器干燥，然后再在4‑25℃贮存，可有效延长种子的贮存期，且贮存后6个月后的种子仍能保持较好活性，本发明可降低铁皮石斛种子的储存成本和储存难度。

技术领域

本发明属于种子保存技术领域，具体的说，涉及一种铁皮石斛种子贮存方法。

背景技术

铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）为兰科石斛属附生植物，以干燥茎入药，为我国的传统药材，味甘，微寒，具益胃生津，滋阴清热等功效。铁皮石斛药材长期依赖野生资源，导致资源日渐枯竭， 20世纪90年代以来，铁皮石斛人工栽培技术逐步成熟，采用种子无菌萌发技术，成功实现种苗规模化生产。

由于铁皮石斛蒴果完全成熟时易开裂，种子暴露在空气中，不方便外植体消毒，目前生产中一般采用随采随播的方式，即消毒处理成熟未开裂蒴果，切取种子进行无菌播种。

石斛新鲜种子含水量较高（30-40%），生理代谢活动较旺盛，采摘后如果不及时播种，直接长时间储存，种子易失去活性。由于铁皮石斛种子细小，一个蒴果含有上万粒种子，非常适合采用超低温保存技术进行贮存。将种子存放在-196℃液氮超低温环境中，几乎可完全停止种子生命代谢活动，从而达到长期储存的目的。相关研究表明，经干燥处理24ｈ的铁皮石斛种子在液氮(-196℃)中保存60、90 d，种子活力显著高于常温、４℃及-20℃下的种子活力，而种子常温（25℃）保存90 d，种子活力下降明显，萌发率仅为33.80％；4℃下保存90天，种子活性降低至52.21%。张治国等研究发现铁皮石斛种子含水量降到 8.21%，其萌发率与未脱水的种子萌发率相近，而种子含水量8.21 % -18.79 %时，液氮冷冻贮存萌发率与正常种子没有明显差别。王君晖等研究发现铁皮石斛种子含水量为 8%-19%时, 液氮超低温保存后种子的存活率可达95%。但液氮保存石斛种子中，冻存和化冻两个过程，易发生细胞损伤，影响种子活性，往往需要添加PVS2等保护剂进行预处理，增强种子的超低温耐性。这无形中增加了液氮储存石斛种子的难度和成本。此外，研究也发现液氮储存的石斛种子，萌发期会延长7-10 d。关于超低温贮存前后细胞生理生化变化规律仍不清楚。

对于石斛种苗生产企业，超低温贮存需要具备专门液氮存贮设备及相应种子贮存操作技术，推广应用难度较大，生产中急需一种有效简便的种子贮存技术方法，以满足石斛种子中短期贮存需要。

发明内容

为了克服背景技术中存在的问题，本发明提供一种铁皮石斛种子贮存方法，通过在无菌条件下控制干燥湿度，降低石斛种子含水量，不需要冷冻即可有效延长石斛种子的保存期，且所得种子保存时间可达6个月以上，贮存后种子活力90.00%以上。本发明的技术降低了石斛种子的保存成本和技术难度，满足了种苗生产企业对铁皮石斛种子中短期贮存的需要。

为实现上述目的，本发明是通过如下技术方案实现的：

一种铁皮石斛种子贮存方法，包括以下步骤：

（1）无菌条件下，用吸水剂脱水干燥种子至含水量3.00-7.00%；

（2）将脱水干燥后的种子，在无菌环境中转入无菌的冻存管中，密封贮存。

进一步，步骤（1）中，干燥过程中环境湿度1-3%RH，干燥温度20-25℃。

进一步，步骤（2）中，密封贮存温度为4-25℃。

进一步，步骤（1）中，无菌环境中，消毒灭菌处理后蒴果，切取种子，放入已灭菌的带除菌过滤膜的培养盒中进行吸水干燥。

进一步，所述的灭菌种子来源于采收饱满、未开裂，果皮黄绿色的蒴果。

进一步，所述吸水剂为变色硅胶或氯化钙。

本发明的有益效果：