[发明专利]铁皮石斛无性组培快繁技术

说明书

本发明公开了铁皮石斛无性组培快繁技术，包括以下步骤：S1、外植体母本选择；S2、铁皮石斛外植体处理；S3、原球茎及无菌芽诱导；S4、原球茎增殖、分化同步培养；S5、生根壮苗培养。本发明与现有技术相比的优点在于：1、选用铁皮石斛鲜条任意茎段为外植体，其取材广，2、可大量、快速、持续获得成熟的原球茎，3、生产出来的种苗变异小，品种纯正，4、解决了现有植物茎段组培技术中外植体灭菌不彻底，不易消毒的问题。

技术领域

本发明涉及铁皮石斛培育技术领域，具体是指铁皮石斛无性组培快繁技术。

背景技术

目前铁皮石斛的种苗工厂化生产中，绝大部分以种子有性组培快速繁殖为主，种子组培虽然周期短、技术简单易行，但该技术培育的种苗，性状差异大，遗传不稳定，变异大，种出来的鲜条成品五颜六色，且容易退化，对铁皮石斛成品质量难以保证，对品种优良种性难以延续。而以铁皮石斛茎段为外值体材料进行无性技术组培快繁，生产出来的种苗变异小，品种遗传稳定，鲜条纯度高，基本一个颜色，成品质量得到保障，有效解决了种子有性组培繁殖变异大、产品质量得不到保证的问题。现如今，提高铁皮石斛种苗遗传稳定性，确保铁皮石斛成品质量，已成为铁皮石斛人工种植需要解决的首要问题。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服上述缺陷，提供一种种苗差异小和产品质量稳定的铁皮石斛无性组培快繁技术。

1、为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：铁皮石斛无性组培快繁技术，包括以下步骤：

S1、外植体母本选择：选择品种纯，黑节明显，条形好，长势粗壮的铁皮石斛鲜条作为母本外植体；

S2、铁皮石斛外植体处理：将铁皮石斛母本鲜条用洗洁精或洗衣粉水清洗表皮，再用清水冲洗干净，在无菌操作台内用害剋溶液浸泡消毒40分钟，再用0.1％升汞溶液灭菌20分钟后，取出灭菌好的铁皮石斛鲜条置于无菌操作盘内，将鲜条切成带1－2个节的铁皮石斛茎段；

S3、原球茎及无菌芽诱导：将上述鲜条切成的铁皮石斛茎段接种到以下培养基中进行培养，MS+2，4-D0.01mg/L+NAA0.5-1.0mg/L+6-BA1.3-1.9mg/L+香蕉汁50-60g/L+土豆汁60g/L+活性碳0.8g/L+蔗糖25g/L+琼脂5.4g/L，PH值调为5.8，培养时间35-45天，茎段节处长出铁皮石斛无菌芽，茎基部长出大量原球茎；

S4、原球茎增殖、分化同步培养：将上述铁皮石斛原球茎转接到下列培养基中，改良MS+NAA0.8-1.0mg/L+6-BA0.6-1.0mg/L+KT0.5-1.0mg/L+花宝1号0.5g/L+香蕉汁50mg/L+土豆汁60g/L+活性碳0.8g/L+蔗糖25g/L+琼脂5.4g/L，PH值调为5.8，培养时间30天，同步实现原球茎增殖及芽分化；

S5、生根壮苗培养：将S3中分化的铁皮石斛无菌芽转接到下列生根壮苗培养基中，1/2N6+NAA0.3-0.5mg/L+IBA0.5-0.8mg/L+花宝1号1.0g/L+香蕉汁75-80g/L+活性碳0.8g/L+蔗糖30g/L+琼脂5.4g/L，PH值调为5.8，培养时间80天后移栽。

作为改进，所述害剋溶液为纯净水和害剋灭菌液按照7比3比例混合配置。

作为改进，所述母本外植体的铁皮石斛鲜条在通过害剋溶液浸泡消毒前去除叶片。

作为改进，所述原球茎及无菌芽诱导过程需要在温度为26℃，光照3000Lux，光照时间为6小时/天的环境下完成培养。

作为改进，所述原球茎增殖、分化同步培养过程需要在温度为25℃，光照3000Lux，光照时间为8小时/天的环境下完成培养。

作为改进，所述生根壮苗培养过程需要在温度为26℃，光照4000Lux，光照时间为9小时/天的环境下完成培养。