[发明专利]一种罗非鱼Igλ单克隆抗体及应用

说明书

本发明属于生物工程技术领域，涉及一种罗非鱼Igλ单克隆抗体及应用，所述的单抗由杂交瘤细胞株（CCTCC NO:C202137）分泌获得，该抗体能够特异性识别血清中Igλ链及组织中Igλ⁺B细胞，进一步的使用鼠抗Igλ的单抗检测了无乳链球菌感染后罗非鱼血清中识别无乳链球菌表面抗原Sip的抗体水平，结果显示罗非鱼血清中识别Sip的抗体水平显著增加，表明此抗体可以用于检测罗非鱼免疫后的抗体水平，为罗非鱼疫苗的研发和免疫效果的评价奠定了基础。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，涉及一种罗非鱼Igλ单克隆抗体及应用。

背景技术

罗非鱼(Oreochromis mossambicus)是世界性经济鱼类，具有生长快、肉质好、繁殖能力强、适应性广等优点。但近年来病害频发，其中由无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)引起的链球菌病尤为突出，给养殖户造成巨大的经济损失。由于抗生素的不断使用，抗生素耐药性问题日益严重，严重影响水产养殖业的可持续发展，而疫苗可激活鱼类免疫系统，提高机体针对特定病原的抗病力，将是罗非鱼链球菌病的重要免疫预防手段，也是未来鱼类疾病防控的主流方向。但对于疫苗免疫效果的评价往往过程繁琐，耗时较长，且缺乏评价标准，而以鱼类免疫球蛋白(Ig)的单克隆抗体为基础，通过分析被接种疫苗的鱼类的血液和黏液中抗体(分泌到体液中的抗原特异性Ig)水平变化规律来评价疫苗免疫效果的方法，将为建立罗非鱼疫苗免疫效果的评价标准体系提供有力的工具。因此对罗非鱼Ig单克隆抗体的研究有助于深入了解罗非鱼体液免疫应答规律，并能帮助建立罗非鱼抗体分析与检测方法，继而建立以罗非鱼抗体水平为基础评价疫苗免疫效果的方法，推动罗非鱼免疫诊断与疫苗接种等疫病防控技术的发展。

硬骨鱼类含有3种免疫球蛋白，即：IgM、IgT和IgD，其中起抗体功能的主要为IgM和IgT。现有研究表明，硬骨鱼类IgM主要在系统免疫中起功能，而IgT主要在黏膜免疫中起功能。很多疫苗，尤其是口服和浸泡疫苗，能同时激活机体的系统免疫和黏膜免疫，因此，要准确评价此类疫苗的接种效果，就需要同时检测IgM和IgT的抗体滴度，这需要同时有这两类Ig的抗体，且制备和检测都费时费力。

鱼类Ig轻链包括Igλ、Igσ和Igκ三个亚型，由于鱼类Ig轻链的恒定区只有一个Ig结构域，而重链恒定区至少含有4个Ig结构域，因此在单抗筛选过程中针对轻链的杂交瘤细胞较少，所以抗鱼类Ig轻链的单克隆抗体比抗重链的单克隆抗体更难获得。到目前为止，已报道的能识别鱼类Ig轻链的单克隆抗体只有抗斑点叉尾鮰Igσ和Igκ的单克隆抗体，尚无针对Igλ的单克隆抗体。

发明内容

本发明针对现有技术中罗非鱼Igλ单克隆抗体缺失的问题，提供了一种分泌鼠抗罗非鱼Igλ单克隆抗体的杂交瘤细胞，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：CCTCC NO:C202137。

本发明的另一个目的在提供了罗非鱼Igλ单克隆抗体，其由保藏编号为：CCTCCNO:C202137的杂交瘤细胞分泌得到。

本发明的最后一个目的在于提供了上述杂交瘤细胞分泌的单抗在检测罗非鱼免疫球蛋白Igλ中的应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

申请人利用纯化的天然罗非鱼IgM作为抗原，免疫小鼠，进行阳性B细胞、WB、单抗产量等条件的筛选，最终获得了一株杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株分泌的单抗，特异性地识别Igλ，单抗产量大，效价高，上述杂交瘤细胞，已于2021年01月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，分类命名：杂交瘤细胞株4-6，保藏编号为：CCTCC NO:C202137，地址为：中国武汉武汉大学。

本发明的保护范围还包括：由保藏编号为：CCTCC NO:C202137的杂交瘤细胞分泌得到的单抗。