[发明专利]一种包含BMP2模拟肽和SDF-1的可注射透明质酸水凝胶的制备方法

权利要求书

1.一种包含BMP2模拟肽和SDF-1的可注射透明质酸水凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）制备包含BMP2模拟肽的透明质酸水凝胶前体溶液

1-1）制备己二酸二酰肼修饰的透明质酸HA-ADH；

1-2）制备氧化透明质酸HA-CHO；

1-3）将上述所制备的产物HA-ADH和HA-CHO分别用BMP2模拟肽溶液溶解形成包含BMP2模拟肽的HA-ADH溶液和包含BMP2模拟肽的HA-CHO溶液，两者即为包含BMP2模拟肽的透明质酸水凝胶前体溶液；

2)制备复合SDF-1的丝素蛋白微球

2-1）制备丝素蛋白微球：以Ca₂CO₃作为丝素蛋白微球的核心，丝素蛋白包覆于Ca₂CO₃外；

2-2）将SDF-1与丝素蛋白微球在溶液中通过正负电吸附原理进行复合形成复合SDF-1的丝素蛋白微球；

3）将复合SDF-1的丝素蛋白微球与包含BMP2模拟肽的透明质酸水凝胶前体溶液混合，形成包含BMP2模拟肽和SDF-1的可注射透明质酸水凝胶。

2.根据权利1所述的制备方法，其特征在于，所述己二酸二酰肼修饰透明质酸HA-ADH的具体制备方法为：透明质酸与己二酸二酰肼于EDC和HOBT活化条件下反应制备得到HA-ADH。

3.根据权利1所述的制备方法，其特征在于，所述氧化透明质酸（HA-CHO）的制备方法为:将透明质酸利用高碘酸氧化制备得到HA-CHO。

4.根据权利1所述的制备方法，其特征在于，所述丝素蛋白微球的具体制备方法为：

a、制备丝素蛋白微球核心-Ca₂CO₃模板：将Na₂CO₃溶液加入搅拌中的CaCl₂溶液中，形成Ca₂CO₃模板；

b、将步骤a制备的Ca₂CO₃模板离心，去上清液，加入乙醇-水，离心，去上清液，然后加水离心多次，去上清液；

c、加入水，重悬，然后加入纯化的丝素蛋白，垂直混悬后，离心清洗，加甲醇-水，再次垂直混悬，离心清洗；

d、重复步骤c，进行多层包覆；

e、当包裹到理想层时，加入戊二醛溶液，垂直混悬、离心，水洗得丝素蛋白微球。

5.根据权利4所述的制备方法，其特征在于，步骤a中，Ca₂CO₃模板制备中，Na₂CO₃与CaCl₂摩尔比为1:1。

6.根据权利4所述的制备方法，其特征在于，步骤b中，加入乙醇和水的体积比为1:1-1:3。

7.根据权利4所述的制备方法，其特征在于，步骤c中，加入甲醇和水的体积比为1:5-1:10。

8.根据权利4所述的制备方法，其特征在于，步骤c中，纯化的丝素蛋白的具体制备过程为：向丝素粉中加入LiBr溶液，放于预热的水浴锅里搅拌，之后转移到透析袋超纯水透析，之后经离心，滤膜过滤保存。

9.根据权利8所述的制备方法，其特征在于，透析袋的截留分子量为3500 MW。

10.根据权利8所述的制备方法，其特征在于，滤膜的孔径为0.22 μm。