[发明专利]西藏灵芝免疫调节蛋白的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种西藏灵芝免疫调节蛋白的制备方法，其特征在于，通过克隆得到西藏灵芝免疫调节蛋白基因后，通过基因重组构建重组真核表达载体pPIC9K::FIP-gle-His并线性化，再将重组真核表达载体转化到毕赤酵母GS115中形成毕赤酵母工程菌株，经发酵、表达和纯化得到西藏灵芝免疫调节蛋白FIP-gle；

所述的西藏灵芝免疫调节蛋白基因，其核苷酸序列FIP-gle如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的西藏灵芝免疫调节蛋白的制备方法，其特征是，所述的重组真核表达载体pPIC9K::FIP-gle-His，通过将FIP-gle基因序列连接于pPIC9K真核表达载体得到。

3.根据权利要求1所述的西藏灵芝免疫调节蛋白的制备方法，其特征是，所述的发酵表达，通过将重组真核表达载体pPIC9K::FIP-gle-His转入大肠杆菌DH5α感受态细胞，经酶切和酵母转化后将酵母转化子单克隆至液体培养基后发酵得到蛋白，再经过纯化处理得到。

4.根据权利要求3所述的西藏灵芝免疫调节蛋白的制备方法，其特征是，所述的液体培养基，其配方为：1％酵母提取物、2％蛋白胨、1.34％YNB、1％生物素、1％甲醇、0.1mol/L磷酸缓冲液。

5.根据权利要求1或3所述的西藏灵芝免疫调节蛋白的制备方法，其特征是，所述的发酵，发酵温度为30℃，诱导剂为1％甲发酵液体积的纯甲醇(每24h)，诱导时间为96h。

6.一种根据权利要求1-5中任一所述方法制备得到的西藏灵芝免疫调节重组蛋白的应用，其特征在于，以2mg/L～16mg/L的有效浓度制备抗癌药剂，以促进巨噬细胞RAW 264.7分泌细胞因子TNF-α。

7.根据权利要求6所述的西藏灵芝免疫调节重组蛋白的应用，其特征是，所述的有效浓度为4mg/L。