[发明专利]一种人脑组织和动物器官用透明化试剂及透明化成像方法

说明书

本发明公开了一种人脑组织和动物器官用透明化试剂及透明化成像方法。透明化试剂是由1,3‑双(氨基甲基)环己烷和3‑[3‑(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐(CHAPS)溶于蒸馏水中形成的混合试剂；其中，1,3‑双(氨基甲基)环己烷与蒸馏水的质量体积比为5％～40％，CHAPS与蒸馏水的体积比为5％～25％。与现有技术相比，本发明的透明试剂能够有效对人脑组织和动物器官进行快速透明，且荧光友好，适用性广。

技术领域

本发明属于生物样品组织处理领域，具体涉及一种人脑组织和动物器官透明化试剂及透明化成像方法。

背景技术

组织光透明技术是利用化学试剂对生物组织进行处理，改变生物组织内部的折射率，从而提高光对生物组织的穿透，进而提高光学显微镜对生物组织的成像深度，有利于实现大体积生物组织的三维重构和神经环路解析。目前光透明技术最常用的技术路线可分为四类：一是简单浸泡型，主要有SeeDB等方法，该类方法试剂成分简单，但是透明效果往往较差。二是有机溶剂型，代表方法有DISCO系列，该类方法通过有机溶剂对生物组织进行脱水和折射率匹配，这类方法透明效果往往较好，但是对于生物组织的破坏比较严重。三是水化型，代表方法为CUBIC系列，该类方法一般对于生物组织的保护较好，荧光兼容性好。四是水凝胶型，代表方法主要为CLARITY系列，该类方法通常能取得很好的透明度，但是由于使用了表面活性剂处理，这使得生物组织会发生严重的膨胀，且细胞膜结构被完全破坏，而且表面活性剂渗透入组织的速度很慢，透明所需的技术成本较高。

发明内容

本发明的目的在于提出一种使用便捷、速度快且对于人脑组织和动物器官荧光友好的生物组织透明化试剂及其应用。

为了实现上述目的，本发明的技术方法包括以下内容：

一、一种生物组织透明化试剂

透明化试剂的主要试剂成分包括1,3-双(氨基甲基)环己烷和3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐(CHAPS)，所述1,3-双(氨基甲基)环己烷与蒸馏水的质量体积比为5％～40％；所述CHAPS与蒸馏水的质量体积比为5％-25％。

优选的，所述所述1,3-双(氨基甲基)环己烷与蒸馏水的质量体积比为20％；所述CHAPS与蒸馏水的质量体积比为15％。

所述的CHAPS为市售产品，是主要的透明化成分，作用溶解脂质。

二、一种离体的人脑组织和动物器官的透明化方法，包括：

将离体的人脑组织和动物器官进行预处理。

将预处理后的生物组织浸泡在上述的生物组织透明化试剂中。

所述预处理包括组织固定、组织切片、免疫染色、化学燃料染色、病毒标记中的一种或多种。

三、一种生物组织透明化试剂在生物组织透明处理和成像中的应用

本发明的有益效果：

1)本发明所使用的透明化试剂成分简单，且可根据不同场景灵活选择；

2)本发明的方法简单易行，适用性广；

3)相比于已发表的组织透明化试剂，本发明提出的试剂能够缩短样品处理的时间。

附图说明

图1为本发明实施例1中300微米厚的小鼠大脑切片在试剂处理前后的对比图；

图2为本发明实施例2中小鼠肾脏在试剂处理前后的对比图；

图3为本发明实施例3中500微米厚的人类大脑切片在试剂处理前后的对比图；

图4为本发明实施例3中500微米厚的人类大脑切片在试剂处理后的荧光成像图；