[发明专利]重组JO-1抗原的制备方法和应用

说明书

本申请公开了一种重组JO‑1抗原的制备方法和应用。本申请中，开发了基于基因工程技术的JO‑1抗原制备方法，将经同义密码子偏好性优化的编码JO‑1抗原的多核苷酸导入载体，成功构建原核表达质粒，提高了目的蛋白的表达量；该方法还经过培养基和培养温度等培养条件的优化，实现了高比例可溶性蛋白的表达，所得抗原活性高；该方法制备的JO‑1抗原，活性相比于市售抗原显著提高近3倍，化学发光法检测发光值最高可达到973万。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，特别涉及重组JO-1抗原的制备方法和应用。

背景技术

Jo-1抗原本质为组氨酰-tRNA合成酶(HisRS)，在蛋白合成过程中催化组氨酸与对应的tRNAHis结合生成组氨酰-tRNA。组氨酰-tRNA合成酶是一类结缔组织病(自身免疫病)多肌炎(PM)和皮肌炎(DM)的标志性自身抗体的抗原，临床上称之为Jo-1。

抗Jo-1抗体是PM/DM的标记性抗体，在多发性肌炎(PM)中阳性率达25％左右，在皮肌炎(DM)中阳性率为7.1％。合并肺间质病变的PM/DM患者，阳性率高达60％。因多肌炎和皮肌炎患者的血清中含有特异性的抗Jo-1抗体，故Jo-1可用于临床鉴别和诊断多肌炎和皮肌炎。

有关抗Jo-1抗原常用的检测方法有酶联免疫吸附试验、免疫印迹法等，目前国内的检测试剂盒多为进口或者进口原料组装，价格昂贵，很大程度上限制了Jo-1蛋白检测的推广和应用。因此当前急需的是自主开发Jo-1抗原作为检测原料，摆脱依赖进口的现状。

Jo-1抗原的空间结构复杂，体外重组表达可溶性蛋白困难。国内一些提取Jo-1抗原的相关报道显示天然提取纯化方法存在来源困难、提取步骤繁琐、质量和活性不稳定等问题；重组Jo-1抗原虽然解决了天然纯化的部分问题，但仍存在产率低、稳定性差、产物活性低等问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种重组JO-1抗原制备方法。

本发明的另一目的在于提供一种编码JO-1抗原的多核苷酸序列。

本发明的另一目的在于提供与编码JO-1抗原的多核苷酸序列适配的载体。

本发明的另一目的在于提供含有编码JO-1抗原的多核苷酸序列的试剂盒。

为解决上述技术问题，本发明第一方面，提供了一种编码JO-1抗原的多核苷酸，所述多核苷酸经密码子优化，且所述多核苷酸选自以下任一种：

(i)具有如SEQ ID NO.2所示序列的多核苷酸；

(ii)具有与如SEQ ID NO.2所示序列的同源性大于95％的多核苷酸；和

(iii)具有与(i)或(ii)中所述的多核苷酸序列互补的多核苷酸。

本发明第二方面，提供了一种表达载体，所述表达载体包括本发明第一方面提供的多核苷酸。

在一些优选的方案中，所述表达载体包括表达His×6标签的多核苷酸序列，更优选地，所述表达载体中，所述的多核苷酸的5’端连接有表达His×6标签的多核苷酸序列。

在一些优选的方案中，所述表达载体为大肠杆菌表达载体，更优选为pET-28a(+)。

本发明第三方面，提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包括本发明第二方面提供的表达载体；或者

所述宿主细胞的基因组中整合有如本发明第一方面提供的多核苷酸。

在一些优选的方案中，所述宿主细胞为大肠杆菌(Escherichia coli)。

在一些优选的方案中，所述宿主细胞为大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株。