[发明专利]一种提高植物乳杆菌活性的新方法及复合菌剂的制备

说明书

本发明提供了一种提高植物乳杆菌活性的新方法，包括如下步骤：(1)获得黄芪提取物；(2)获得甘草提取物；(3)获得杜仲叶提取物；(4)将黄芪提取物、甘草提取物和杜仲叶提取物按照比例混合，获得提取物混合溶液；(5)取植物乳杆菌接种至MRS液体培养基中，并在培养箱中过夜培养，获得活化种子液；(6)在MRS液体培养基中加入活化种子液，再加入3％～10％的提取物混合溶液，进行共培养。本发明还提供了一种复合菌剂的制备方法。本发明通过将黄芪、甘草和杜仲叶提取物添加于植物乳杆菌中共培养来显著提高植物乳杆菌的活性，通过将提取物混合溶液干燥成粉与冻干的植物乳杆菌菌粉混合来制成复合菌剂，开发一种绿色饲料添加剂。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一种提高植物乳杆菌活性的新方法及复合菌剂的制备。

背景技术

植物乳杆菌是乳酸菌的一种，属于厌氧或兼性厌氧菌，比较适宜在30～35℃左右的环境中生存。相比其他同类型菌，植物乳杆菌菌的活菌数比较高，在其繁殖过程中会产生大量的乳酸杆菌素，还能产生柠檬酸、病菌素、双氧水以及双乙酰等物质，可以使其生存环境酸碱度维持稳定，还有抗菌的功效，能调整胃肠道内微生物菌群有益菌的平衡，促进营养物质的吸收。因此，植物乳杆菌可以作为益生菌饲料添加剂用于养殖业。

但是，在作为饲料饲喂后，植物乳杆菌需要有效耐受动物的消化系统，特别是胃酸和胆盐对其活性的影响。因此，如何提高现有植物乳杆菌饲料的生长繁殖能力和耐酸耐胆盐能力，成为当前领域亟待解决的难题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种提高植物乳杆菌活性的新方法及复合菌剂的制备，其通过将黄芪、甘草和杜仲叶添加于植物乳杆菌中共培养来显著提高植物乳杆菌的活性(即，生长繁殖能力和耐酸、耐胆盐能力)，通过将黄芪、甘草和杜仲叶提取物混合溶液干燥成粉与冻干的植物乳杆菌菌粉混合来制成复合菌剂，作为一种绿色饲料添加剂用于养殖业。

本发明采用以下技术方案解决上述技术问题：

一种提高植物乳杆菌活性的新方法，包括如下步骤：

(1)向黄芪片中加入清水，浸泡过夜；煎煮三次，过滤后得原药液；取原药液离心取上清液，获得黄芪提取物；

(2)将甘草片与清水煮沸，过滤获取第一次浸提液；将过滤后的残渣与清水再次混合煮沸，过滤获取第二次浸提液；将第一次和第二次获取的浸提液混合，获得甘草提取物；

(3)向杜仲叶中加入乙醇，浸泡过夜；次日，提取三次；过滤后进行旋转蒸发，获得杜仲叶提取物；

(4)将获得的黄芪提取物、甘草提取物和杜仲叶提取物按照2：1：2的比例混合，获得提取物混合溶液；

(5)用接种环划取植物乳杆菌，将其接种至MRS液体培养基中，并在39℃的培养箱中过夜培养，获得活化种子液；

(6)在新鲜的MRS液体培养基中加入1％的上述活化种子液，再加入3％～10％的提取物混合溶液，在39℃温度下共培养。

作为本发明的优选方式之一，所述步骤(1)中，向黄芪片中加入清水，浸泡过夜；煎煮三次，每次1h，过滤后得原药液；取原药液离心5min，取上清液，获得黄芪提取物。

作为本发明的优选方式之一，所述步骤(2)中，将甘草片与清水煮沸1h，过滤获取第一次浸提液；将过滤后的残渣与清水再次混合煮沸30min，过滤获取第二次浸提液；将第一次和第二次获取的浸提液混合，获得甘草提取物。

作为本发明的优选方式之一，所述步骤(3)中，向杜仲叶中加入60％乙醇，浸泡过夜；次日，在80℃下提取三次，每次1h；过滤后进行旋转蒸发，获得杜仲叶提取物。

作为本发明的优选方式之一，所述步骤(1)中，黄芪与清水的质量比为1：10，用四层纱布过滤；离心条件为20℃，11000rpm/min，获得离心取上清液定容至200mL；