[发明专利]抗原载体菌株及在制备金黄色葡萄球菌口服疫苗中的应用

说明书

本发明公开了一种抗原载体菌株、重组菌株及其在制备金黄色葡萄球口服疫苗中的应用，菌株为LR076，于2022年9月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.25845，保藏地址为.北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为Limosilactobacillus reuteri；重组菌株由携带有外源金黄色葡萄球菌抗原片段的重组质粒转化至LR076菌株中形成；所述抗原片段包括Hlasubgt;H35L/subgt;、IsdB、MntC，分别如SEQ IDNO.1～SEQ ID NO.3所示。将重组菌株应用于制备金黄色葡萄球菌口服疫苗中，能有效缓解感染后肺脏的病变及减少金黄色葡萄球菌在肺脏的定值量。

技术领域

本发明涉及金黄色葡萄球菌口服疫苗技术领域，更具体地说是涉及抗原载体菌株及在制备金黄色葡萄球菌口服疫苗中的应用。

背景技术

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，S.aureus)是全世界范围内最常见的人兽共患的病原体之一，其导致人类感染的疾病范围很广，包括肺炎在内的侵袭性感染是全球严重疾病和死亡的主要原因。随着多重耐药细菌所致感染的涌现及其引发疾病死亡率的逐年攀升，安全有效的S.aureus疫苗研发刻不容缓，而其疫苗研发均在临床试验阶段以失败而告终。基于对S.aureus免疫逃逸机制的认识，S.aureus疫苗在临床阶段失败的原因可能在于并没有将重点放在疫苗对细胞免疫和黏膜免疫的激活，而是专注于开发基于体液免疫应答的疫苗。越来越多的研究表明，基于活菌载体及纳米递送颗粒的黏膜疫苗可能是未来S.aureus疫苗研发的理想方向。

黏膜是人体和动物体中表面积最大的组织器官，包括消化道、呼吸道、泌尿生殖道等。黏膜表面与外界(如环境、食物、共生菌和病原菌等)直接接触，因此作为第一道防线在抗感染中发挥极其重要的作用。目前，大多数病原微生物与黏膜表面接触从而侵入机体，传统的全身性疫苗通常由皮下注射，不能诱导抗原特异性黏膜应答，无法防止上皮表面的致病性侵袭，而黏膜疫苗不仅能诱导黏膜免疫应答，还能诱导全身免疫应答，且能在病原体入侵的早期阶段发挥免疫保护作用，有效克服现有疫苗的局限性。使用合适的递送载体将抗原稳定递送至特定黏膜免疫诱导部位，能同时诱导黏膜和系统免疫反应，从而能达到针对黏膜侵袭性病原体的双层保护的效果。

乳酸菌作为极具发展潜力的呈递载体，在用于向黏膜呈递各种治疗性和预防性分子中表现出诸多优点。首先是通过口服途径免疫，使用方便，安全性好、最大限度地减少由肌肉内或静脉内注射带来的副作用和疼痛，还能减少污染。其次，不需要纯化表达的蛋白，产能迅速，蛋白产物中也不会混杂内毒素。另外，许多乳酸菌菌株特别是乳酸杆菌，在动物或人体内能够耐受极端的胃肠道环境(例如降解酶和极端pH环境等)，并且具有很强的黏附定植能力，利于长期投递药物分子。最重要的是，乳酸菌本身具有益生特性和佐剂特性，在更安全的同时，能保护抗原不被降解，延长抗原在黏膜位点的留存时间，促进外源蛋白向吞噬细胞的递呈。以乳酸菌为活菌载体开发的新型S.aureus黏膜疫苗是研究者们初涉的领域，并且越来越受到关注

因此，如何提供一种可以作为活菌载体的乳酸杆菌是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种抗原载体菌株及在制备金黄色葡萄球菌口服疫苗中的应用。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种抗原载体菌株，所述菌株为LR076，于2022年9月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.25845，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为Limosilactob acillus reuteri。

作为与上述技术方案相同的发明构思，本发明还请求保护一种重组菌株，其特征在于，所述重组菌株由携带有外源金黄色葡萄球菌抗原片段的重组质粒转化至LR076菌株中形成；所述抗原片段包括Hla_H35L、IsdB、MntC，分别如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.3所示。