[发明专利]一组降低雪茄烟叶氯含量的转基因引物、载体、转化体、试剂盒及其应用和方法

说明书

本发明“一组降低雪茄烟叶氯含量的转基因引物、载体、转化体、试剂盒及其应用和方法”属于转基因技术领域。本发明提供一组降低雪茄烟叶氯含量的转基因引物，其包括：序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的上下游引物P1和P2；或，序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示的上下游引物P3和P4。本发明还提供基于该引物获得的转基因载体、转化体、试剂盒和方法。本发明转基因引物获得的重组载体转化获得的转化体转基因烟草植株后可以使转基因烟草植株体内的氯离子含量大幅度降低，最高的降低率接近70％。

技术领域

本发明涉及遗传工程技术领域，具体涉及一组降低雪茄烟叶氯含量的转基因引物、载体、转化体、试剂盒及其应用和方法。

背景技术

近年来我国雪茄消费市场迅速扩展，这为中式雪茄的发展提供了机遇。烟草属于弱耐氯作物，烟叶氯离子含量过高会产生叶片变厚、脆，弹性下降，燃烧性差，香气量下降等一系列弊端。土壤氯离子含量和施氯量影响烟株氯含量、积累量。烟叶氯离子含量处于0.3-0.6％之间时烟叶燃烧性较好，而我国雪茄烟叶氯离子含量偏高为1％左右。

本领域亟需开发一种可有效且显著降低雪茄烟叶氯离子含量的产品或方法。

发明内容

基于本领域现有技术存在的上述不足和需求，本发明的目的是提供一组降低雪茄烟叶氯含量的转基因引物、载体、转化体、试剂盒及其应用和方法。本发明在培育低氯离子含量雪茄烟叶品种，满足我国雪茄烟产业的可持续发展方面具有广阔的应用前景。

本发明的技术方案如下：

一组降低雪茄烟叶氯含量的转基因引物，包括：序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ IDNO.2所示的上下游引物P1和P2；或，

序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示的上下游引物P3和P4。

所述的一组降低雪茄烟叶氯含量的转基因引物，包括：序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的上下游引物P1和P2；和，

序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示的上下游引物P3和P4。

一种降低雪茄烟叶氯含量的转基因载体，为采用序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ IDNO.2所示的上下游引物P1和P2，或，序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示的上下游引物P3和P4，以pCBC-DT1T2质粒DNA为模板PCR扩增得到的产物与pHSE401载体连接得到的重组转基因载体。

一种降低雪茄烟叶氯含量的转化体，为将采用序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ IDNO.2所示的上下游引物P1和P2，或，序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示的上下游引物P3和P4，以pCBC-DT1T2质粒DNA为模板PCR扩增得到的产物与pHSE401载体连接得到的重组转基因载体转化至感受态细胞得到的转化体。

所述感受态细胞为农杆菌感受态细胞；

优选地，所述农杆菌感受态细胞为农杆菌感受态细胞C58C1。

一种降低雪茄烟叶氯含量的试剂盒，其包括：序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ IDNO.2所示的上下游引物P1和P2；和/或，

序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示的上下游引物P3和P4。

所述的一种降低雪茄烟叶氯含量的试剂盒还包括：PCR试剂、酶切试剂、连接转化试剂。

所述的一组降低雪茄烟叶氯含量的转基因引物、或所述的一种降低雪茄烟叶氯含量的转基因载体、或所述的一种降低雪茄烟叶氯含量的转化体、或所述的一种降低雪茄烟叶氯含量的试剂盒在降低雪茄烟叶氯含量方面的应用。