[发明专利]枯草芽孢杆菌及其应用

说明书

本申请提供一种枯草芽孢杆菌及其应用，枯草芽孢杆菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2022年5月23日，保藏编号为CGMCC No.24947，其命名为枯草芽孢杆菌EhrBS‑9，枯草芽孢杆菌是从健康的仔猪猪粪中分离纯化获得，在LB平板上，以37℃培养24h后，菌落形态呈现灰白色，扁平近圆形，表面湿润，边缘整齐，菌落皱褶微凸起，透明性差；在显微镜下观察细胞呈杆状，革兰氏染色为阳性，枯草芽孢杆菌在抑制革兰氏阳性致病菌中的应用，尤其是对产气荚膜梭菌的抑制作用好。本申请提供的枯草芽孢杆菌既有拮抗能力、又有较强抗逆能力，同时其代谢产物还需具有优异的耐受性，从而可以发挥活菌和代谢产物的双重功效。

技术领域

本申请涉及微生物技术领域，尤其涉及一种枯草芽孢杆菌及其应用。

背景技术

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一种芽孢杆菌科细菌，是批准使用的主要的饲料级益生菌品种之一，它能够产生抗逆性强的芽孢，生长习性好氧，其菌体具有繁殖速度快、易培养、抗逆性强等特点，并且能产生多种酶类，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等，促进动物对营养物质的消化吸收。

枯草芽孢杆菌能够调节肠道内微生物菌群之间的微生态平衡，调节细菌或病毒导致的腹泻或急慢性肠炎等疾病造成肠道微生态功能紊乱，枯草芽孢杆菌制剂通过调整肠道菌群失调，治疗并恢复肠道功能；枯草芽孢杆菌既能产生抗菌物质，又具有独特的生物脱氧作用机制，能抑制致病菌例如金黄色葡萄球菌(StapHylococcus aureus)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)等的生长繁殖，有效地调理胃肠道功能紊乱。

枯草芽孢杆菌本身虽然具有一定的抗逆性，但大多数枯草芽孢杆菌对胃肠道的耐受性较差，并且一般枯草芽孢杆菌产生的次级代谢产物不能耐受高盐、高酸、高碱等环境，因此，亟需筛选分离出一种既有拮抗能力、又有较强抗逆能力的枯草芽孢杆菌菌体，同时其代谢产物还需具有优异的耐受性，从而发挥活菌和代谢产物的双重功效。

发明内容

有鉴于此，本申请的目的在于提出一种枯草芽孢杆菌及其应用用以解决上述技术问题。

本申请的第一方面，提供了一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，保藏编号为CGMCC No.24947，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地点为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏时间为2022年5月23日，其命名为枯草芽孢杆菌EhrBS-9。

进一步地，所述枯草芽孢杆菌是从健康的仔猪猪粪中分离纯化获得，在LB(Lysogeny Broth，即溶菌肉汤)平板上，以37℃培养24h后，菌落形态呈现灰白色，扁平近圆形，表面湿润，边缘整齐，菌落皱褶微凸起，透明性差；在显微镜下观察细胞呈杆状，革兰氏染色为阳性。

进一步地，所述枯草芽孢杆菌的16S rDNA序列如SEQ ID No：1所示，所述枯草芽孢杆菌的gyrB序列如SEQ ID No：2所示。

所述枯草芽孢杆菌的16S rDNA和gyrB序列在Genbank核酸序列数据库中用BLAST(Basic Local Alignment Search Tool，生物大分子序列比对搜索工具)进行同源性分析，得到相似性99％以上的序列，运用MEGA软件构建系统发育树，证明该菌株属于枯草芽孢杆菌，结合形态学及生理生化特征鉴定为枯草芽孢杆菌EhrBS-9。

本申请的第二方面，一种微生物制剂，包括如上第一方面所述的枯草芽孢杆菌和/或其代谢产物。

本申请的第三方面，提供了如上第一方面所述的枯草芽孢杆菌或如上第二方面所述的微生物制剂在抑制革兰氏阳性致病菌中的应用，所述革兰氏阳性致病菌包括产气荚膜梭菌和金黄色葡萄球菌，尤其是对产气荚膜梭菌的抑制作用。