[发明专利]一种SNP检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种SNP检测试剂盒，配方包括：Tris、（NH4）₂SO₄、KCl、MgCl₂、dATP、dCTP、dGTP、dTTP、MTHFR 677R1、MTHFR 677T-F1、MTHFR C677-F1、MTHFR 677T-MGB、MTHFR C677-MGB、Taq酶、DNA模板以及水，其特征在于：各组分的用量或终浓度分别是：10～50mM的Tris、125～375mM的（NH4）₂SO₄、0～50mM的KCl、1.5～5mM的MgCl₂、0.05～0.4uM的dATP、0.05～0.4uM的dCTP、0.05～0.4uM的dGTP、0.05 ～0.4uM的dTTP、0.05～1pM的MTHFR 677R1、0.05～0.5pM的MTHFR 677T-F1、0.05～0.5pM的MTHFR C677-F1、0.05～0.5pM的MTHFR 677T-MGB、0.05～0.5pM的MTHFR C677-MGB、0.05～0.2U/μl的Taq酶、1～50ng/反应DNA模板以及适量的水。

2.根据权利要求1所述的一种SNP检测试剂盒，其特征在于：所述Tris、（NH4）₂SO₄、KCl、MgCl₂、dATP、dCTP、dGTP、dTTP、MTHFR 677R1、MTHFR 677T-F1、MTHFR C677-F1、MTHFR 677T-MGB、MTHFR C677-MGB、Taq酶、DNA模板以及水的总体积之和为30μL。

3.根据权利要求1所述的一种SNP检测试剂盒，其特征在于：所述Tris的pH为8.3。

4.根据权利要求1所述的一种SNP检测试剂盒，其特征在于：所述水为经过处理的纯化水。

5.一种SNP检测方法，包括以下步骤：步骤一，设计引物；步骤二，引入突变；步骤三，设计探针；步骤四，提取；步骤五，处理；步骤六，反应；其特征在于：

其中上述步骤一中，在SNP位置设计ARMS-qPCR引物；

其中上述步骤二中，为了减少引物的非特异扩增，两条等位基因引物在SNP位点前后1-2个碱基处，人为各引入一个突变；

其中上述步骤三中，设计等位基因特异性的MGB探针；

其中上述步骤四中，采用外周血DNA提取试剂盒提取EDTA或枸橼酸钠抗凝的基因组DNA；

其中上述步骤五中，采用荧光PCR仪、高速离心机、低速离心机、恒温干浴器、漩涡震荡仪、冰箱以及其他设备对SNP进行处理；

其中上述步骤六中，使用SNP检测试剂盒对步骤五中处理后的SNP进行检测，在检测反应的过程中，第一步为在95℃的环境温度下进行10分钟的一个循环；第二步为在95℃的环境温度下处理10秒，然后在60℃的环境温度下处理35秒，然后进行45个循环，设置在60℃下进行检测FAM、HEX的荧光收集；第三步为在25℃的环境温度下处理10秒；随后即可对反应结果进行分析。

6.根据权利要求5所述的一种SNP检测方法，其特征在于：所述步骤二中，引入的突变所处的位置是不同的。

7.根据权利要求5所述的一种SNP检测方法，其特征在于：所述步骤三中，等位基因存在3个碱基差异，因此MGB探针不容易非特异杂交显色。