[发明专利]一种融合蛋白HN-RBD、编码基因、重组NDV病毒载体、重组NDV病毒及其应用

说明书

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种融合蛋白HN‑RBD、编码基因、重组NDV病毒载体、重组NDV病毒及其应用；所述融合蛋白HN‑RBD包含新城疫病毒HN蛋白的部分结构域和新冠病毒S蛋白的RBD；所述新城疫病毒HN蛋白的部分结构域包括新城疫病毒HN蛋白的胞内结构域和跨膜结构域。当本发明的融合蛋白HN‑RBD的编码序列与新冠病毒S蛋白或新冠病毒S蛋白变体的编码序列组合共同插入NDV病毒载体中时，可以使得重组NDV病毒粒子表面展示更多的新冠病毒抗原S蛋白，同时提高重组NDV病毒产生黏膜免疫抗体IgA的能力，对开发优秀的重组NDV病毒疫苗候选株具有重大意义。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种融合蛋白HN-RBD、编码基因、重组NDV病毒载体、重组NDV病毒及其应用。

背景技术

新冠(SARS-CoV-2)病毒是一类主要的呼吸道病毒，新冠病毒通过囊膜表面的S蛋白与宿主细胞膜上ACE2蛋白相互作用感染人体。因此，针对新冠病毒S蛋白产生高效的抗体是疫苗研发的关键。

新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)是一种负链RNA病毒，基因组包括NP、P、M、F、HN、L六大基因，其中，F蛋白和HN蛋白属于病毒囊膜蛋白，HN蛋白包含胞内结构域，跨膜结构域以及胞外结构域，胞外结构域含有Stalk和Head两部分。NDV载体可以负载外源基因，以NDV为载体经过反向遗传学的方法产生的重组NDV病毒粒子具有良好的安全性，作为疫苗株产生体液以及细胞免疫以外，还可以产生黏膜免疫，从根源阻止呼吸道类病原体对生物体的感染和在感染部位定殖。

重组NDV病毒产生更多的抗原抗体IgG以及IgA有两大因素，一是重组DNV病毒粒子携带的抗原蛋白基因所表达的抗原蛋白有良好的免疫原构象；二是重组NDV病毒粒子表面能够展示更多的抗原蛋白。如何使得重组NDV病毒粒子表面能够展示更多的抗原蛋白是一直以来悬而未解的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种融合蛋白HN-RBD、编码基因、重组NDV病毒载体、重组NDV病毒及其应用，本发明的方法能够使重组NDV病毒粒子表面展示更多的新冠病毒抗原S蛋白。

本发明提供了一种融合蛋白HN-RBD，包含新城疫病毒HN蛋白的部分结构域和新冠病毒S蛋白的RBD；所述新城疫病毒HN蛋白的部分结构域包括新城疫病毒HN蛋白的胞内结构域和跨膜结构域。

优选的，所述新城疫病毒HN蛋白的部分结构域还包括新城疫病毒HN蛋白的胞外Stalk结构域。

优选的，所述新城疫病毒HN蛋白的部分结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示或SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供了上述方案所述融合蛋白HN-RBD的编码基因。

本发明还提供了上述方案所述的融合蛋白HN-RBD或者所述的编码基因在提高新城疫病毒囊膜粒子表面S蛋白展示量和/或提高重组新城疫病毒产生黏膜免疫抗体IgA的能力中的应用。

本发明还提供了一种重组NDV病毒载体，以新城疫病毒为原始载体，插入有上述方案所述的编码基因和新冠病毒S蛋白或新冠S蛋白变体的编码基因；所述新冠S蛋白变体的编码基因指与新冠S蛋白同源性大于90％的蛋白的编码基因；所述新冠S蛋白变体包括S2P、S2P/GSAS或S6P；所述S2P是将新冠病毒S蛋白胞外域进行K986P和V987P突变；所述S2P/GSAS是在S2P基础上将第682～685位氨基酸RRAR突变为GSAS；所述S6P是在S2P基础上进行F817P、A892P、A899P和A942P突变。

优选的，所述新冠病毒S蛋白或新冠S蛋白变体的编码基因插入在新城疫病毒载体的P基因和M基因之间；所述融合蛋白HN-RBD的编码基因插入在新城疫病毒载体载体的M基因和F基因之间或者插入在新城疫病毒载体载体的P基因和M基因之间。