[发明专利]miR-541在制备肝纤维化/肝硬化无创诊断及预后评估试剂盒中的应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体是miR‑541在制备肝纤维/肝硬化无创诊断及预后评估试剂盒中的应用。本发明利用血清miRNA抽提、逆转录、RT‑PCR方法测定肝硬化患者血清中miR‑541的表达量，并结合随访信息，确定miR‑541表达量与肝硬化患者预后存在相关性，miR‑541能用于制备判断肝硬化患者预后的无创分子标记，对于预防或延迟代偿期肝硬化出现失代偿等治疗也具有重要的指导意义。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，涉及一种微小RNA的应用，具体地说，是miR-541在制备肝纤维/肝硬化无创诊断及预后评估试剂盒中的应用。

背景技术

肝纤维化是肝硬化的早期阶段，一旦进展为肝硬化，尤其进展为失代偿期肝硬化，许多并发症如肝性脑病、食管静脉曲张破裂出血、腹水合并感染等会接踵而至，生存率急剧下降，成为危及患者生命的重大疾病之一。其主要表现为肝脏在长期受到各种急慢性损伤因素如病毒(HBV/HCV、毒素、药物、酒精、氧化应激因子等)刺激下，出现的肝星状细胞(Hepatic stellate cells，HSCs)持续激活、细胞外基质过度沉积，HSCs活化是肝纤维化发生的关键环节。目前肝纤维化机制不十分清楚，尤其关键靶点、细胞及分子有待进一步深入研究证实。多种信号通路、分子均可通过抑制或维持HSCs活化及增殖，从而抑制或维持肝纤维化的发生发展。

肝纤维化的早期识别及干预，有望逆转纤维化，阻断其进展为不可逆转的肝硬化或肝癌。目前诊断方法主要包括肝穿病理学检测、超声、核磁共振等影像学检查、血液标志物、生化模型、肝脏硬度值检测等，肝穿病理学检测仍然为肝纤维化诊断的金标准，但其创伤大，很多患者难以接受，核磁共振等影像学检查费用昂贵，许多患者望而却步；近年来随着无创诊断技术的推广及进步，越来越多的研究着眼于血清标志物及生化模型等相关无创诊断手段，其中微小RNA(miRNAs)因其在血清中稳定存在，备受研究者青睐，可能作为良好的无创诊断生物标志物、治疗靶向及预后因子。目前关于miRNAs在肝硬化中无创诊断及预后分析的研究数量较少，样本量小，大多局限在某个指标，未深入研究，许多缺乏相关分子机制佐证，尚不足满足临床预测要求。

本领域迫切需要寻找能预测肝纤维化/肝硬化病情及预后的相关无创诊断标志物，这方面的研究对临床治疗肝纤维/肝硬化及预防肝癌发生具有重要意义。

微小RNA 541(microRNA 541，miR-541)是长度为22个核苷酸的非编码RNA(UGGUGGGCACAGAAUCUGGACU，SEQ ID NO:1)，位于人14号染色体上，为DLK1/DIO3印记基因区的miRNA簇成员之一。我们既往研究肝细胞核因子4α时发现其可以转录调控DLK1/DIO3印记基因区的miR-379-656簇，miR-541亦在该簇中。我们既往关于miR-541在肝癌中的作用研究提示其可以抑制肝癌，与肝癌预后有关，且可以通过抑制自噬抑制索拉菲尼的耐药(Xu WP,et al.miR-541potentiates the response of human hepatocellular carcinoma tosorafenib treatment by inhibiting autophagy.Gut.2020；69(7):1309-1321)。miR-541除影响肝癌、胆管细胞癌等肿瘤，还可影响细胞分化，调控肺和肾纤维化，且在损伤组织中表达下降。而肝纤维化是肝脏对损伤因子做出的修复反应，其分子机制尚不完全清楚，有效的治疗靶点和预后标志物也十分有限。

但是关于miR-541在肝硬化患者血清中的表达变化及是否可作为肝硬化无创诊断标志物及预后评估因子目前还未见报道

发明内容

本发明的目的在于提供miR-541的新应用，特别是在制备肝纤维化/肝硬化无创诊断标志物及预后评估试剂盒中的应用。