[发明专利]一种利用脯氨酸耦合多种胁迫提高雨生红球藻虾青素产量方法

权利要求书

1.一种利用脯氨酸耦合多种胁迫提高雨生红球藻中虾青素产量的方法，其特征在于，所述利用脯氨酸耦合多种胁迫提高雨生红球藻虾青素产量的方法包括：生长期和诱导期两个培养阶段，先在生长期进行微藻的培养使雨生红球藻积累生物量；随后进入诱导期利用非生物胁迫耦合脯氨酸培养，促进虾青素的积累。

2.如权利要求1所述的利用脯氨酸耦合多种胁迫提高雨生红球藻中虾青素产量的方法，其特征在于，所述利用脯氨酸耦合多种胁迫提高雨生红球藻虾青素产量的方法还包括：先在生长期进行藻种培养，使藻细胞快速生长，积累一定的生物量；随后在缺氮、高光和高盐条件下添加脯氨酸培养雨生红球藻，并置于一定的温度的环境下培养，检测、分析雨生红球藻生物量、虾青素含量和产率。

3.如权利要求1所述的利用脯氨酸耦合多种胁迫提高雨生红球藻中虾青素产量的方法，其特征在于，所述利用脯氨酸耦合多种胁迫提高雨生红球藻虾青素产量的方法包括以下步骤：

步骤一，进行雨生红球藻种子液的培养，积累生物量；

步骤二，利用脯氨酸耦合多种非生物胁迫培养微藻，促使雨生红球藻积累虾青素；

步骤三，利用有机溶剂提取步骤二得到的培养液中藻细胞内的虾青素。

4.如权利要求3所述的利用脯氨酸耦合多种胁迫提高雨生红球藻中虾青素产量的方法，其特征在于，所述步骤一中雨生红球藻种子液培养采用的培养基为BG-11培养基。

5.如权利要求3所述的利用脯氨酸耦合多种胁迫提高雨生红球藻中虾青素产量的方法，其特征在于，所述步骤一中雨生红球藻种子液培养采用的温度为23-25℃和光照25-50μmol/m²/s。

6.如权利要求3所述的利用脯氨酸耦合多种胁迫提高雨生红球藻中虾青素产量的方法，其特征在于，所述步骤一中的雨生红球藻种子液培养在3000mL的圆底瓶中，并用气泵通入无菌空气。

7.如权利要求3所述的利用脯氨酸耦合多种胁迫提高雨生红球藻中虾青素产量的方法，其特征在于，所述雨生红球藻为雨生红球藻Haematococcuspluvialis LUGU。

8.如权利要求3所述的利用脯氨酸耦合多种胁迫提高雨生红球藻中虾青素产量的方法，其特征在于，所述步骤二中的利用脯氨酸耦合非生物胁迫培养雨生红球藻包括：向培养基中添加不同浓度的脯氨酸，重悬浮种子液至500mL的锥形瓶中，确保微藻接种量；连续通入空气，并置于一定温度和光照强度的环境下培养，得到最终的培养液。

9.如权利要求8所述的利用脯氨酸耦合多种胁迫提高雨生红球藻中虾青素产量的方法，其特征在于，所述培养基为缺氮BG-11培养基；所述培养温度为28℃，盐度为1g/L，光照强度为250μmol/m²/s；所述添加的脯氨酸浓度分别为50、100、150μmol/L；所述微藻接种量为0.35g/L。

10.如权利要求3所述的利用脯氨酸耦合多种胁迫提高雨生红球藻中虾青素产量的方法，其特征在于，所述步骤三中的利用有机溶剂提取步骤二得到的培养液中藻细胞内的虾青素包括：

将由步骤二得到的最终的培养液经5000r/min离心5min，用蒸馏水洗涤两次；利用5％的氢氧化钾溶液在30％的甲醇中65℃处理15min，以破坏叶绿素；藻细胞以5000r/min离心5min，用蒸馏水洗涤3次；将处理后的藻细胞用5mL二甲基亚砜在200W功率下超声处理10min，并在45℃水浴中提取20min；重复提取过程，直到颗粒变得无色；总虾青素用490nm处的吸光度测定法测定。