[发明专利]重组SCCA单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种重组SCCA单克隆抗体及其制备方法和应用，其中重组SCCA单克隆抗体包括由抗SCCA的鼠源抗体的轻链可变区与人IgG1的轻链恒定区构成的轻链和由抗SCCA的鼠源抗体的重链可变区与人IgG1的重链恒定区构成的重链。本发明制备的重组SCCA单克隆抗体蛋白质和基因结构明确，稳定性好，可重复表达。将制备的重组SCCA单克隆抗体应用于检测鳞状细胞癌抗原试剂盒中，临床检测灵敏度高，检测时通过对雅培样本的检测，结果发现本发明重组SCCA单克隆抗体用于试剂盒检测时的检测结果与雅培临床结果相符，与雅培试剂相比无显著差异，因此，本发明制备的重组SCCA单克隆抗体可以用于临床对血清SCCA含量的血清学检测。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其是涉及一种重组SCCA单克隆抗体，本发明还涉及该单抗的制备方法和应用。

背景技术

鳞状细胞癌抗原（SCCA/SCCAg）是肿瘤相关抗原TA-4（Tumor Associated-Antigen4）的亚片段，最早由Kato等人从子宫颈鳞状细胞肿瘤组织中提取出来。SCCA表达量升高会使癌细胞抑制细胞凋亡，从而使机体内的几种细胞对自杀机制产生抵抗性。其中SCCA 1型主要在肿瘤组织细胞内部，其主要是木瓜蛋白酶样半胱氨酸蛋白激酶（catL、S 和K）的抑制物，通过抑制作用可以促使癌细胞对机体内的几种细胞自杀机制产生抵抗作用，从而增强肿瘤细胞抵抗细胞程序性凋亡的能力。SCCA 2型释放于循环系统中，其主要是糜蛋白酶样蛋白激酶（catG）的抑制物，通过抑制作用可抵抗catG介导的炎症反应，从而保护肿瘤细胞免受降解。

SCCA作为鳞癌肿瘤标志物，具有较好的特异性，对于子宫颈癌、肺癌（非小细胞肺癌）等鳞状上皮细胞起源的癌症具有辅助诊断的意义。早期研究表明，患有宫颈鳞状细胞癌的妇女血清中的SCCA水平要高于健康人群的水平。同时其它相关研究也表明，血清中的SCCA水平可以指示患有宫颈鳞状细胞癌的妇女体内病灶的扩张，所以SCCA水平可有助于早期诊断、检测复发和疾病状态监测，对于其他类型的鳞状细胞癌（口腔、食道、舌、头颈等），SCCA也具有一定的辅助诊断价值。但该标志物的检测主要用于对恶性肿瘤患者病情的动态监测，不宜用于早期诊断或普通人群筛查等目的。

抗体是生物科学领域的主力，长期以来，鼠源性的单克隆抗体被广泛的应用于科研、临床诊断和治疗，但是由于鼠源性的mAb会引起人抗鼠抗体（HAMA）反应，从而限制了其在临床方面的应用。因此，对鼠源性抗体特别是SCCA单克隆抗体进行改造使其安全应用在临床中是非常必要的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种重组SCCA单克隆抗体。

本发明还提供了上述重组SCCA单克隆抗体的制备方法。

本发明还提供重组SCCA单克隆抗体在制备检测鳞状细胞癌抗原试纸或试剂盒方面的应用。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的重组SCCA单克隆抗体，包括由抗SCCA的鼠源抗体的轻链可变区与人IgG1的轻链恒定区构成的轻链和由抗SCCA的鼠源抗体的重链可变区与人IgG1的重链恒定区构成的重链。

当所述轻链可变区含有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列时，所述重链可变区含有如SEQ ID NO.2 所示的氨基酸序列；

当所述轻链可变区含有如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列时，所述重链可变区含有如SEQ ID NO.6 所示的氨基酸序列。

本发明还提供了上述重组SCCA单克隆抗体的制备方法，包括下述步骤：

第一步，用免疫原制备杂交瘤细胞株并从其中提取RNA，反转录获得cDNA；

第二步，设计引物，以cDNA为模板，扩增含有SEQ ID NO.1/ SEQ ID NO.5的轻链可变区和含有SEQ ID NO.2/ SEQ ID NO.6的重链可变区的编码基因；