[发明专利]鉴别珍珠鳖性别的分子标记、引物对及其应用

说明书

本发明属于分子生物学方法鉴定动物性别的技术领域，具体涉及一种鉴别珍珠鳖性别的分子标记、引物对及其应用。基因组DNA包含如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示序列的珍珠鳖，鉴别为雌性；基因组DNA包含如SEQ ID NO：3所示序列的珍珠鳖，鉴别为雄性。基于本发明中提供的鉴别珍珠鳖性别的分子标记鉴别珍珠鳖性别的方法，该方法不受年龄和样本限制，成本低、操作简便、可进行大批量鉴定，鉴别快速、结果直观准确，避免了采用传统方法耗时长、成本高和易出错等缺点，可以快速且准确的对各个时期的珍珠鳖进行性别鉴定，可缩短育种时间、大幅提高产量和降低饲养成本。

技术领域

本发明属于分子生物学方法鉴定动物性别的技术领域，具体涉及一种鉴别珍珠鳖性别的分子标记、引物对及其应用。

背景技术

龟鳖类是较古老且形态最为特化的一支爬行动物，在地球上出现的最早记录是晚三叠纪，距今已有约2.2亿年的历史，被称为“活化石”。珍珠鳖(Apaloneferox)又名佛罗里达软壳龟，隶属于爬行纲(Reptilia)，龟鳖目(Chelonia)，鳖科(Trionychidae)，软鳖属(Palea)。原产于美国东南部，因其个体较大、裙边宽厚、营养丰富、味道鲜美，近年来引进我国。在生长方面，珍珠鳖雌性生长快、性成熟个体大，雄性则相反，存在很显著的性别差异。

珍珠鳖外形与中华鳖相似，生长也存在显著的性别差异，雌性生长快、性成熟个体大，雄性则相反，存在很显著的性别差异，即珍珠鳖养殖业具有高效全雌繁育的需求。目前，在珍珠鳖养殖过程中存在一个普遍的现象：养殖周期内，经过1-3次筛选分塘，“去雄留雌”，最终实现单养雌鳖的养殖模式。然而，鳖的养殖周期长、性成熟晚，雌雄要到1冬龄以上才能够通过外形鉴别，且鉴别效率低。如果能在鳖出壳后就对其遗传性别进行鉴定，可以在鳖苗早期就实现单性分塘养殖，养殖成本可以相应降低，其产量和效益也会显著提高。

一般来说，脊椎动物性别决定机制大致可以分为遗传性别决定(geneticsexdeterminati-on,GSD)和环境性别决定(environmentalsexdetermination,ESD)。不同于哺乳动物、鸟类等高等脊椎动物的体性别决定依赖于遗传物质，龟鳖类处于动物性别决定方式由环境决定型到基因决定型的过渡环节，为鳖类动物性别决定机制的阐明带来了困难。随着生物技术的发展，对中华鳖性别决定方式的认定由开始的温度依赖型(TSD)机制逐渐发展为基因决定型(GSD)机制的(ZZ/ZW型)。有学者揭示出鳖类动物的W性染色体的18SrRNA拷贝数比Z大很多，并设计了利用qPCR检验18SrRNA扩增的重复拷贝数的方法来鉴别雌雄，成功率为90％，但该方法成本昂贵，操作繁琐，且有10％的错误率。

因此，一种操作简单、成本低廉、鉴别效率、准确率高且能在性成熟前鉴别珍珠鳖性别的方法是有必要的。

发明内容

针对以上问题，本发明目的之一在于提供一种鉴别珍珠鳖性别的分子标记，通过鉴定该分子标记的在珍珠鳖全基因组DNA中的情况，就可以在珍珠鳖性成熟前准确地进行性别鉴定。

为了达到上述的目的，可以采用以下技术方案：

本发明一方面提供一种鉴别珍珠鳖性别的分子标记，其包括如SEQ ID NO：1、SEQID NO：2和SEQ ID NO：3所示序列，基因组DNA包含如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示序列的珍珠鳖，鉴别为雌性；基因组DNA包含如SEQ ID NO：3所示序列的珍珠鳖，鉴别为雄性。

本发明另一方面提供一种鉴别珍珠鳖性别的引物对，其为特异性扩增包括如SEQID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的序列的引物对。

本发明再一方面提供一种鉴别珍珠鳖性别的检测试剂，其包括权利上述的鉴别珍珠鳖性别的引物对。

本发明再一方面提供一种鉴别珍珠鳖性别的试剂盒，其包括上述的检测试剂。