[发明专利]一种检测可复制性慢病毒的探针、引物、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种引物对，其特征在于，所述引物对包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.一种探针，其特征在于，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

3.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1所述的引物对和如权利要求2所述的探针。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，其还包括可复制性慢病毒的参考品、Taq酶、dNTP、Mg²⁺、反转录酶、RNase free H₂O、扩增缓冲液和上样缓冲液中的一种或多种。

5.一种检测可复制性慢病毒的方法，其特征在于，其用如权利要求3或4所述的试剂盒来检测可复制性慢病毒。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(i)获得样品中的核酸；

(ii)将所述核酸和标准品在同一反应体系下，在qPCR仪中进行扩增；

(iii)根据标准曲线，计算所述核酸的拷贝数。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(ii)包括：(a)RNA反转录；(b)高温变性和(c)循环扩增；其中(a)的反应条件为50～60℃10～15min；(b)的反应条件为90～98℃10～30s；(c)的反应条件为90～98℃10～30s，58～62℃30s～1min，35～40个循环。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，(a)的反应条件为50℃15min；(b)的反应条件为95℃30s；(c)的反应条件为95℃15s，60℃1min，40个循环。

9.如权利要求6～8任一项所述的方法，其特征在于，步骤(iii)中，用RNase Free H₂O将所述质粒DNA参考品进行梯度稀释，获得5～10个浓度的标准品，将所述标准品与样品在同一块PCR板中进行扩增，即得所述标准曲线；优选地，所述梯度稀释为10倍稀释，所述标准品含6～7个浓度。

10.如权利要求1所述的引物对、权利要求2所述的探针或权利要求3或4所述的试剂盒在制备检测可复制性慢病毒的诊断剂中的应用。