[发明专利]一种防治植保青枯雷尔氏菌、丁香假单胞菌病害的新型噬菌体及其应用

说明书

本发明提出了一种防治植保青枯雷尔氏菌、丁香假单胞菌病害的新型噬菌体及其应用，所述噬菌体于2020年12月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2020945。所述噬菌体是自复制短尾病毒科（Autographiviridae）的噬菌体新种，其在NCBI官网GeneBank登录号为OP617560.1。该噬菌体噬菌谱广，能同时裂解青枯雷尔氏菌36株、丁香假单胞菌17株，能更有效的解决农作物种植中出现的细菌病害感染问题，可作为用于防治植保青枯雷尔氏菌、丁香假单胞菌病害的微生态制剂。

技术领域

本发明涉及植保防治技术领域，具体涉及一种防治植保青枯雷尔氏菌、丁香假单胞菌病害的新型噬菌体及其应用。

背景技术

青枯病是农作物生产中高发的一种细菌性土传病害，该病主要由青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum，简称Rs.)侵染引起。该病菌在世界各地均有分布，寄主范围广泛，可侵染54个科450余种植物，主要侵染茄科作物，如烟草、番茄、辣椒，还可侵染花生、胡椒、生姜、香蕉、桑树等重要农作物。由于青枯菌寄主范围广泛、潜伏侵染能力强以及变异能力极强，青枯病的防治一直是植物病害防治方面的一大难题。青枯菌一旦侵染上植物，植株就会表现出迅速萎蔫、枯死、茎叶仍保持绿色、病茎的褐变部位用手挤压有乳白色菌液排出的症状。且植株发病达到中期后，将无药可治，对农户造成了很大的损失。

丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)侵染的宿主范围广，致病性强，传播快，短时间能造成植物大面积死亡，丁香假单胞菌能产生植物毒素，这些植物毒素通过破坏细胞膜通透性、抑制酶活性诱发植物致病，其中冠菌素、菜豆毒素和烟草毒素常使植物萎黄，脂肽毒素导致组织溃疡坏死。除了肉眼可观察到的改变外，植物毒素还可在生化水平改变宿主的代谢活动，危害十分严重。

针对雷尔氏菌、丁香假单胞菌病害，目前只能通过提前预防或者在发病出期使用农药、抗生素、化学试剂等进行治疗，但农药、抗生素、化学试剂对青枯病、丁香假单胞菌病害的治疗效果并不好，且还会造成农药、抗生素残留。而生物防治对环境友好，不会对人体健康带来潜在威胁的问题，因此引起了国内外广大学者的重视。噬菌体由于其高效特异裂解性与专一宿主性，可以针对某一特定的有害细菌菌株有选择性地杀灭它们，使用时不会给生态环境中其他有益菌群造成伤害。噬菌体不仅具有指数式增殖的自我复制能力，只需极少量即可杀灭相应的致病菌，达到预防或控制细菌性感染的目的，而且噬菌体环境丰度高，自然界中普遍存在细菌相应的噬菌体，易于分离且纯化周期短，还能在常温下保存，便于运输和应用。总而言之，噬菌体制剂产品是较为安全的食品安全生物防控手段，具有安全高效、特异性强、稳定性高、自我增殖快、筛选周期短以及不影响食品感官品质等优点，发展前景非常广阔。噬菌体产品代替抗生素是形势所需，因此，开发噬菌体产品具有重大意义。

本项目以噬菌体复合制剂高密度生产技术为核心，研究和开发一种可治理植物青枯病、丁香假单胞菌病的微生态制剂，建立一整套从高活性一系列的噬菌体的驯化和筛选、高密度噬菌体复合制剂发酵生产工艺，实现噬菌体复合制剂的大规模工业化生产和试用。我们开发的噬菌体复合制剂与常规噬菌体制剂相比，创新性在针对一系列的有害病菌特异性的噬菌体，避免了常规的噬菌体产品的治理有害病菌谱窄、见效慢和稳定性差的缺点；与常规益生菌制剂相比，噬菌体复合制剂产品具有治理见效快、安全、无害的特点。植保噬菌体微生态制剂具有对环境友好、对非靶标生物安全以及对植保病害具有特异性杀菌效果等优点，不同于抗生素和化学制剂，其是完全源于自然的绿色环保产品，广泛应用于植保种植领域和食品安全领域，在种植业中替代抗生素、农药用于防病抗病、克服过量使用抗生素带来的致病菌耐药性问题及农药滥用带来的环境污染问题，已成为当前生物技术研究的热点。然而，噬菌体对宿主有高度专一性，因此噬菌谱窄的噬菌体一般不能解决在植保种植过程中出现的多种细菌病害感染问题。

发明内容