[发明专利]一种微生物保存液及其使用方法

说明书

本发明属于微生物保存技术领域，涉及一种微生物保存液及其使用方法。本发明提供的微生物保存液，以质量份计，由以下有效成分构成：聚乙烯醇42‑75份、低密度脂蛋白2‑3份、四氢嘧啶6‑40份、硫乙醇酸钠0.5‑1.2份和甘油100份。本发明提供的微生物保存液为微生物保存提供载体，能有效保护微生物活性，提高菌体存活率和菌体活性。

技术领域

本发明属于微生物保存技术领域，涉及一种微生物保存液及其使用方法。

背景技术

病原微生物也是一种重要的生物资源，它的保存不仅有利于重现已经做过的实验，证实发现新的菌种，而且也是研究、推广、开发和实际应用科研成果的基础。保存的菌种有的是开发利用的对象，有的是悉心研究的成果，有从自然界分离得到的，有经生物技术修饰改造获得的，都有着极大的研究价值和开发利用的潜力。

为得到一种能长期保存菌种的理想方法，以便更好地为科研、教学提供标准菌株。不同菌种或不同要求，适用不同的保藏方法，一般微生物培养物的保藏方法为：斜面保藏、液体石蜡保藏、冷冻干燥保藏、液氮超低温保藏法、低温冷冻保藏法。斜面保藏法，保藏期短；液体石蜡保藏法，必须直立存放，占空间大，不便携带；冻干保藏、液氮超低温保藏法，技术复杂，技术含量高，设备投入高，运行成本高，适合专业保藏机构，不适合生产企业。

低温保藏法是将菌种放置在低温冰箱中以减缓生理活动而进行的一种保藏方法。目前采用的保藏方法有两种：一是4℃冰箱直接保存（短期）；二是，菌液中加入一定比例的甘油混合后-80℃保存（中长期）。低温保存，无论是4℃还是-20℃、-80℃，加入一定比例的保护剂，可有效保护微生物活性，提高菌体存活率。对于各种微生物种类及结构不同，其在低温保存中的最佳保护剂配方也不同。目前，现有的微生物低温保存保护剂常见的为甘油、甘露醇、脱脂奶粉或培养液中的一种。但是，实验结果证明，现有的微生物采用甘油作为低温保存保护剂，微生物经过低温保存后的存活率和菌体活性仍然不高。

发明内容

本发明的目的在于开发出一种微生物保存液，针对肠道内病原菌种，提高微生物经过低温保存后的存活率和菌体活性。

基于上述目的，本发明提供了一种含纳米颗粒的微生物核酸检测试剂盒及检测方法来满足本领域的这种需要。

一方面，本发明涉及一种微生物保存液，其以质量份计，由以下有效成分构成：聚乙烯醇42-75份、低密度脂蛋白2-3份、四氢嘧啶6-40份、硫乙醇酸钠0.5-1.2份和甘油100份；优选地，以质量份计，由以下有效成分构成：聚乙烯醇53份、低密度脂蛋白2.6份、四氢嘧啶27份、硫乙醇酸钠0.8份和甘油100份。

进一步地，本发明提供的微生物保存液中，其制备方法为：将聚乙烯醇水浴加热到60℃后，加入四氢嘧啶和硫乙醇酸钠，混合均匀后降温至35-40℃，加入低密度脂蛋白和甘油，搅拌均匀调整pH至7.2-7.4，115℃灭菌15min。

进一步地，本发明提供的微生物保存液中，使用方法为：将所述微生物保存液水浴加热至35-40℃，检测pH维持为7.2-7.4，加入待保存菌种，采用惰性气体加压冷冻保存。

进一步地，本发明提供的微生物保存液中，所述惰性气体为氦气、氩气、氙气中的一种，所述惰性气体的气体浓度不低于85%；优选地，所述惰性气体为氦气。