[发明专利]负载外泌体促进糖尿病创面修复的共聚水凝胶

说明书

本发明公开了一种负载外泌体促进糖尿病创面修复的共聚水凝胶，通过2‑甲基丙烯酰氧乙基胆碱磷酸与水凝胶混合后共聚，再与外泌体特异性结合得到。本发明公开了一种负载外泌体促进糖尿病创面修复的共聚水凝胶的制备方法。本发明拟针对糖尿病创面的病理特点，制备出一种共聚合水凝胶，利用两性离子MCP，MCP即为2‑甲基丙烯酰氧乙基胆碱磷酸，通过其上的胆碱磷酸与外泌体上磷酸胆碱进行特异性结合，可有效负载外泌体并起到缓释作用，同时通过物理负载方法加载抗菌纳米粒子，将该水凝胶应用于糖尿病创面可有效起到抗菌以及促进血管生成的作用。

技术领域

本发明涉及一种共聚水凝胶。

背景技术

目前临床上针对糖尿病溃疡的传统治疗包括早期清创、注射胰岛素、提供外源生长因子、自体/异体皮肤移植以及改善微循环等，但这些方法往往效果单一，价格昂贵或是治疗周期过长，取得的效果并不理想。

对于糖尿病患者的创面修复，如何诱导巨噬细胞向M2极化和促进血管形成是两个需要在不同阶段关注的关键科学问题，以达到有效调控炎症反应、运送氧气/营养物质/免疫细胞等到达损伤部位，从而促进皮肤创面的愈合。

现有技术存在的待解决问题、缺陷或不足：

1.直接注射外泌体不能全面、均匀的覆盖于创区，会造成外泌体的流失和浪费，且不能起到缓释作用；

2.生长因子价格昂贵、效果单一；

3.干细胞移植有干细胞的突变致瘤性，异常分化、血管栓塞，以及潜在的免疫排斥风险等。

4.微针可能会造成创面二次损伤。

发明内容

本发明提出了一种负载外泌体促进糖尿病创面修复的共聚水凝胶及其制备方法，解决了现有技术中存在的问题。

本发明的技术方案是这样实现的：一种负载外泌体促进糖尿病创面修复的共聚水凝胶，通过2-甲基丙烯酰氧乙基胆碱磷酸与水凝胶混合后共聚，再与外泌体特异性结合得到。

进一步，所述外泌体为脂肪源外泌体或内皮细胞外泌体。

一种负载外泌体促进糖尿病创面修复的共聚水凝胶的制备方法，包括以下步骤：步骤一，提取外泌体；步骤二，合成2-甲基丙烯酰氧乙基胆碱磷酸；步骤三，共聚水凝胶制备：将2-甲基丙烯酰氧乙基胆碱磷酸与水凝胶混合，再加入引发剂共聚；步骤四，将外泌体与2-甲基丙烯酰氧乙基胆碱磷酸特异性结合。

进一步，提取外泌体的方法为：步骤a:干细胞的提取与培养，提取大鼠脂肪干细胞、人脐静脉内皮细胞，分离纯化、培养传代，步骤b：对外泌体进行鉴定。

进一步，2-甲基丙烯酰氧乙基胆碱磷酸的合成方法包括以下步骤,步骤a:在烧瓶中加入甲醇和三乙胺，再加入四氢呋喃，将混合溶液置于冰盐浴中降温；步骤b:取2-氯-2-氧-1,3,2-二氧磷杂环戊烷与四氢呋喃混匀，滴加到烧瓶中；步骤c:低温反应后升至室温反应，反应结束后得到大量的白色沉淀为三乙胺盐酸盐，用四氢呋喃对三乙胺盐酸盐进行清洗，用减压抽滤的方式分开白色沉淀和浅黄色溶液，对浅黄色溶液减压旋蒸，得到黄色粘稠油状液体；步骤d:将黄色粘稠油状液体加入到乙腈中，加入阻聚剂对苯二酚，在冰水浴条件下，快速加入甲基丙烯酸二甲氨乙酯，反应后减压旋蒸至粘稠，在四氢呋喃溶液中沉淀得棕红色粘稠液体为2-甲基丙烯酰氧乙基胆碱磷酸。

进一步，共聚水凝胶制备方法为：将2-甲基丙烯酰氧乙基胆碱磷酸与水凝胶按照1/2-1/1摩尔比混合均匀，加入抗菌纳米粒子，再加入引发剂共聚。

进一步，所述抗菌纳米粒子为铜纳米粒子。

进一步，通过一锅法使外泌体与2-甲基丙烯酰氧乙基胆碱磷酸特异性结合。