[发明专利]一种白介素-2R检测试剂、制备方法及其检测方法

说明书

一种白介素‑2R检测试剂、制备方法及其检测方法，属于免疫分析领域，解决了现有检测方法存在的准确度低、灵敏度低的问题。该试剂盒包括生物素标记的白介素‑2R抗体1溶液；吖啶酯标记的白介素‑2R抗体2溶液；链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液。本发明制备时使用超滤离心管对白介素抗体进行纯化，减少了检测过程中杂质的干扰，提高了检测的灵敏度和准确度。

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种白介素-2R检测试剂、制备方法及其检测方法。

背景技术

白介素-2R（IL-2R）是由三种独特的膜成分α、β、γ链组成，三者以多肽链间的非共价键连接。α链又称膜IL--2R参与构成IL-2R的高亲合力受体，β、γ链为白细胞介素-2(IL-2)的增殖信号传递所必须。研究发现可溶性白介素 2 受体以较低水平存在于健康个体血清中，水平显著升高见于下列失调性疾病：如自身免疫性疾病，器官移植排斥反应和不同炎症感染等。因此可溶性白介素 2 受体可作为很多涉及免疫反应的失调性疾病的指示物。对白介素2受体的检测，主要用于监测机体的免疫状态、炎症反应等。

目前用于检测白介素-2R的免疫分析方法主要有酶联免疫分析法、放射免疫分析法、荧光分析法。酶联免疫吸附法作为传统分析方法，其灵敏度有待提高；放射免疫分析法灵敏度较高，但存在放射性污染的问题；其他的分析方法存在操作步骤烦琐、费时、设备昂贵等问题。

化学发光免疫分析法采用催化剂催化化学发光物质形成一种激发态中间体，当激发态中间体回到稳定的基态时，发出光子，具有操作简单，自动化程度高，检测速度快等优点，但是市售的白介素抗体含有的少量杂质，会影响检测结果的准确度，尤其是当样本中的待检测物质的含量接近医学检测临界值时，超标或者降低的值只多（少）一点点，就会导致结果的误判。

发明内容

为了解决现有定量检测白介素-2R的方法存在的准确性低、灵敏度低的问题，本发明提供了一种白介素-2R检测试剂、制备方法及其检测方法。

本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：

一种白介素-2R检测试剂，包括：R1试剂：生物素标记的白介素-2R抗体1溶液、R2试剂：吖啶酯标记的白介素-2R抗体2溶液、R3试剂链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，所述的生物素标记的白介素-2R抗体1和吖啶酯标记的白介素-2R抗体2分别作用于白介素-2R的不同表位，所述的白介素-2R抗体1和白介素-2R抗体2两个抗体中至少一个为单克隆抗体。

进一步地，所述的R1试剂浓度为0.3μg/mL-1.0μg/mL，R2试剂浓度为0.3μg/mL-1.0μg/mL，R3试剂含链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液0.2mg/mL-0.5mg/mL。

进一步地，所述的白介素-2R抗体1和白介素-2R抗体2优选两个抗体均为单克隆抗体。

进一步地，所述的R3试剂中，磁微粒为超顺磁微粒，表面的活性基团为羧基、氨基或苯甲磺酰基。

进一步地，所述的吖啶酯采用DMAE类，包括吖啶酯或酰胺类吖啶酯。

进一步地，所述的检测试剂还包括校准品白介素-2R重组蛋白溶液。

一种白介素-2R检测试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

R1试剂的制备：取白介素-2R抗体1置于超滤离心管中，加入0.05M碳酸盐缓冲液，离心后液体弃去，将超滤管倒置于离心管中，加入0.05M碳酸盐缓冲液，离心后收集液体，按白介素-2R抗体1和活化的生物素的质量比5:1-10:1的比例混合，室温避光放置2-4小时后置入透析袋中，将0.05M碳酸盐缓冲液置换为0.05-0.1 M的 PB缓冲液，将收集到的生物素标记白介素-2R抗体1溶液选用标记保存液稀释至0.3μg/mL-1.0μg/mL；