[发明专利]肠道嗜粘蛋白-阿克曼氏菌的检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了特异性引物对，所述特异性引物对包括上游引物AM192F和下游引物AM371R，所述上游引物AM192F的序列如SEQ ID NO：1所示，所述下游引物AM371R的序列如SEQ ID NO：2所示。本发明还公开含有该特异性引物对的检测试剂盒及其应用。本发明还公开了一种肠道嗜粘蛋白‑阿克曼氏菌的检测方法。本发明基于肠道嗜粘蛋白‑阿克曼氏菌的肠道菌群结构分析、临床检验指导和用药、肠道菌群动态平衡研究、预防疾病提供了一种新的方案和途径。

技术领域

本发明属于肠道微生物检测领域，具体涉及肠道嗜粘蛋白-阿克曼氏菌的检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

2004年，Derrien等首次从人体粪便中分离出了嗜粘蛋白-阿克曼氏菌(Akkermansia muciniphila)，通过16S rRNA基因测序分析出其属于疣微菌门，后被归类Akkermansiaceae科，Akkermansiaceae为疣微菌门第II科(Family II.Akkermansiaceaefam.nov.)，Akkermansia属是科内唯一菌属，A.muciniphila是疣微菌门中第一个被成功分离和鉴定的肠道菌。嗜粘蛋白-阿克曼氏菌是革兰氏阴性厌氧菌，呈卵圆形，普遍存在于人体肠道中，约占肠道细菌总数的1％～4％，可以使用胃肠道粘蛋白作为唯一的碳源和氮源。A.muciniphila定植于肠道黏液层，降解黏蛋白，刺激杯状细胞产生更多新的黏蛋白，可降低宿主蛋白的沉积，新生黏蛋白又刺激A.muciniphila的生长，二者形成反馈回路，使肠道黏液层不断更新，对肠上皮细胞起到良好的保护作用。

大量研究表明，肠道中嗜粘蛋白-阿克曼氏菌(Akkermansia muciniphila)的丰度除了与肥胖、II型糖尿病等代谢疾病相关外，还与动脉粥样硬化、阑尾炎、结肠炎、克罗恩病、孤独症等呈负相关。可以看出，嗜粘蛋白-阿克曼氏菌(Akkermansia muciniphila)在宿主体内存在着复杂的机制作用。保持肠道内正常丰度的嗜粘蛋白-阿克曼氏菌(Akkennansia muciniphila)对宿主健康有着重要的影响。

随着益生菌制剂的不断发展，嗜粘蛋白-阿克曼氏菌作为潜在二代益生菌具有很大的开发应用价值，但是目前在其定性、定量检测的方法还不够科学和快速，这在一定程度上限制了嗜粘蛋白-阿克曼氏菌的发展。因此，建立一种方便而且可行的检测嗜粘蛋白-阿克曼氏菌(Akkermansia muciniphila)方法迫在眉睫。

发明内容

发明目的：针对现有技术中的鉴定和检测嗜粘蛋白-阿克曼氏菌所存在的困难，本发明提供了鉴定嗜粘蛋白-阿克曼氏菌(Akkermansia muciniphila)的引物对或试剂盒，并通过建立粪便中嗜粘蛋白-阿克曼氏菌(Akkermansia muciniphila)的定量检测方法，能够快速有效地检测人体肠道内的嗜粘蛋白-阿克曼氏菌(Akkermansia muciniphila)，对肠道菌群结构分析、临床检验指导和用药、保持肠道菌群动态平衡、维持健康、预防疾病等都具有重要意义。

技术方案：为了解决上述技术问题，本发明提供了特异性引物对，所述特异性引物对包括上游引物AM192F和下游引物AM371R，所述上游引物AM192F的序列如SEQ ID NO：1所示，所述下游引物AM371R的序列如SEQ ID NO：2所示。

其中，所述上游引物AM192F和下游引物AM371R扩增的目的片段长度为180bp，目的片段的序列如SEQ ID NO：3所示。

本发明内容还包括所述的特异性引物对或其目的片段在制备检测嗜粘蛋白-阿克曼氏菌的试剂盒中的应用。

本发明内容还包括一种检测嗜粘蛋白-阿克曼氏菌的试剂盒，所述试剂盒包括所述的特异性引物对和/或所述的目的片段。

其中，所述试剂盒还包括实时荧光定量PCR扩增所用的试剂。