[发明专利]具有控释靶向性纳豆激酶-葛根素凝胶微球的制备方法

说明书

本发明公开了一种具有控释靶向性纳豆激酶‑葛根素凝胶微球的制备方法，通过采用低温‑pH诱导法，驱动纳豆激酶的结构发生异化，并添加葛根素进行氢键和共轭相互作用，自组装形成纳豆激酶‑葛根素弱凝胶，然后利用海藻酸钠与氯化钙的静电相互作用进行二次包埋，制备双层凝胶微球。本发明方法制备的产品可以大幅度减少纳豆激酶和葛根素在口腔、胃液内引起的失活，将活性物质运载至小肠释放，进而提升活性物质在人体内的生物利用度，此外还可提高产品的凝胶强度和弹性。

技术领域

本发明涉及食品加工领域，具体为一种具有控释靶向性纳豆激酶-葛根素凝胶微球的制备方法。

背景技术

纳豆激酶是一种碱性丝氨酸蛋白酶，其主要由枯草纳豆芽胞杆菌在发酵纳豆过程中所产生。纳豆激酶的主要功能是治疗和预防血栓病。然而，纳豆激酶在胃酸环境下容易失活，直接口服纳豆激酶会大大降低其溶栓能力。因此，需要寻找合适的方法提高纳豆激酶在人体中的生物利用率。

黄酮类物质是日常饮食中摄入最为丰富的抗氧化剂，具有广泛的生理活性，但在加工、储藏过程及胃环境中的不稳定性、低溶解度，被动扩散和主动外排等因素都会降低黄酮的生物利用度，此外黄酮类化合物在胃肠道(酸碱度、酶的作用)中稳定性差，也是日常饮食中黄酮类化合物生物利用度不高的原因。

因此，制备可靠的运载体系，对纳豆激酶和黄酮等营养物质进行保护，降低其在口腔、胃液内引起的破坏，从而提高活性物质的生物利用度，具有很高的应用价值。

发明内容

本发明的目的是为了提升纳豆激酶、黄酮等营养物质在人体内的生物利用度，提供一种具有控释靶向性纳豆激酶-葛根素凝胶微球的生产方法，本发明所用的技术方案为：

一种具有控释靶向性纳豆激酶-葛根素凝胶微球的生产方法，生产方法具体如下：

S1.称取60-80g纳豆激酶，溶解于2-3L饮用水中后，一起置于直径45-50cm的平底容器内，采用低温-pH诱导法，迫使纳豆激酶的结构发生定向异化，得到料液A；

S2.保持步骤S1低温-pH诱导后的低温环境，将溶解好的葛根素均匀喷洒于料液A中，静置3-4分钟后，采用6-7Gy/min的X-射线进行处理，得到物料B；

S3.将质量浓度为10-12％的海藻酸钠溶液均匀喷洒于物料B中，得到料液C，然后采用孔径800-820纳米的微细管道，将料液C匀速滴入氯化钙溶液中，制得凝胶微球。

步骤S1所述的低温-pH诱导法，具体处理过程为：

采用逐步降温的方法，以2℃/min的速度将纳豆激酶溶液的温度逐步降至2-4℃，保持3-4min，然后采用酸碱缓冲液，以0.2/min的速度调节溶液pH值，迫使纳豆激酶的α-螺旋含量变为42.5-42.8％。

步骤S2所述的X-射线进行处理具体为：

采用X-射线处理20秒、停止15秒，继续使用X-射线处理16秒、停止20秒，接着使用X-射线处理12秒、停止25秒，然后使用X-射线处理8秒、停止30秒。

本发明的有益效果在于：

1、纳豆激酶经过低温-pH诱导后发生结构异化，置于低温环境下，采用X-射线处理(低强度、间歇性逐步减弱)可以在保持纳豆激酶活性位点结构基本不变的情况下，促进葛根素与纳豆激酶在特定肽段的氢键和共轭结合，从而强化纳豆激酶的刚性结构，形成纳豆激酶-葛根素共聚体；采用海藻酸钠和氯化钙进行二次包埋后，可制得结构稳定、功能特性好的凝胶微球。

2、本发明制备的凝胶微球产品控释性能好，可较好地抵御胃液酶的消化，而将纳豆激酶和葛根素运载至小肠释放；在小肠环境内，肠道中pH变化可触发纳豆激酶-葛根素共聚体的解聚，纳豆激酶释放出来后，结构基本复原为天然构象，活性可保留85％以上。

具体实施方式