[发明专利]一种肉锥花组培培养基和组培方法

权利要求书

1.一种肉锥花组培培养基，其特征在于，包括萌发培养基、诱导增殖培养基、分化培养基和壮苗培养基；

所述萌发培养基以MS培养基或1/2MS培养基为基础培养基，还包括：蔗糖30g/L和6.5～7.0g/L琼脂；

所述诱导增殖培养基以1/4MS培养基为基础培养基，还包括：0.2～0.5mg/L6-BA、0.05～0.1mg/LNAA、蔗糖30g/L和琼脂6.5～7.0g/L。

所述分化培养基以1/4MS培养基或1/8MS培养基为基础培养基，还包括：0.1～0.2mg/L6-BA、0.05～0.1mg/LNAA、30g/L蔗糖和6.5～7.0g/L琼脂；所述分化培养基的pH值为6.0～6.5；

所述壮苗培养基包括6.5～7.0g/L琼脂；所述壮苗培养基的pH值为7.0～7.5。

2.根据权利要求1所述的组培培养基，其特征在于，所述萌发培养基的pH值为5.75～5.85；所述诱导增殖培养基的pH值为5.75～5.85。

3.一种肉锥花组培方法，其特征在于，所述组培方法采用权利要求1或2所述的组培培养基，包括以下步骤：

将肉锥花种子接种在萌发培养基上进行萌发培养，获得肉锥花种子苗；将所述肉锥花种子苗接种于诱导增殖培养基依次进行诱导培养和增殖培养，获得肉锥花愈伤组织；

将所述肉锥花愈伤组织接种于分化培养基中进行分化培养，获得肉锥花小苗；

将所述肉锥花小苗转接到壮苗培养基上进行壮苗培养，获得肉锥花组培苗，之后进行炼苗和移栽。

4.根据权利要求3所述的组培方法，其特征在于，所述肉锥花种子苗的直径为3～6mm。

5.根据权利要求3所述的组培方法，其特征在于，所述萌发培养、诱导和增殖培养、分化培养和壮苗培养的温度分别为19～21℃。

6.根据权利要求3所述的组培方法，其特征在于，所述萌发培养、诱导和增殖培养、分化培养和壮苗培养均在光照条件下进行，所述光照的时间分别为12～16h/d，所述光照的强度分别为100～300μmol·m^-2·s^-1。

7.根据权利要求3所述的组培方法，其特征在于，所述诱导和增殖培养培养期间进行继代培养，每隔30～40d继代培养一次；所述分化培养期间还包括继代培养，每隔30～40d继代培养一次；所述壮苗培养期间还包括继代培养，每隔30～40d继代培养一次。

8.根据权利要求3所述的组培方法，其特征在于，所述萌发培养的时间为140～180d；所述萌发培养中肉锥花种子萌芽阶段的时间为20～30d；所述诱导培养和增殖培养的总时间为102～150d；所述诱导培养的时间为42d～60d，所述增殖培养的时间为60～90d；所述分化培养的时间为60～90d；所述壮苗培养的时间为60～90d。

9.根据权利要求3所述的组培方法，其特征在于，所述炼苗在室内完成，所述炼苗的温度为15～30℃，所述炼苗的时间为2～4d；

所述移栽培养在室内完成，所述移栽培养用基质分为上层基质和下层基质，所述上层基质包括赤玉土、鹿沼土和植金石，所述赤玉土、鹿沼土和植金石的体积比为1：1：1；所述下层基质包括泥炭和火山石，所述泥炭和火山石的体积比为1：1。

10.根据权利要求3所述的组培方法，其特征在于，在将肉锥花种子接种在萌发培养基上进行萌发培养前，还包括对肉锥花种子进行清洗和消毒；

所述清洗包括洗涤剂清洗和流水冲洗，所述洗涤剂清洗时间为20～30min，所述流水冲洗时间为60～90min；

所述消毒的方式包括：清洗后，先用质量浓度70％～75％酒精浸泡30～45s，用无菌水冲洗3～5次；再用有效氯浓度为2.5％～3.0％的次氯酸钠溶液浸泡6～8min；最后用无菌水冲洗4～5次。