[发明专利]4-氧代癸酸还原酶突变体及在制备光学纯(R)-γ内酯中的应用在审
申请号: | 202211460747.6 | 申请日: | 2022-11-17 |
公开(公告)号: | CN116042556A | 公开(公告)日: | 2023-05-02 |
发明(设计)人: | 白云鹏;吴易滢;宋渴明;朱一鸣;韩一如;徐殿胜;张晓彦 | 申请(专利权)人: | 华东理工大学 |
主分类号: | C12N9/04 | 分类号: | C12N9/04;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P17/04;C12R1/19 |
代理公司: | 上海科盛知识产权代理有限公司 31225 | 代理人: | 褚明伟 |
地址: | 200237 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 癸酸 还原酶 突变体 制备 光学 内酯 中的 应用 | ||
1.一种4-氧代癸酸还原酶突变体,其特征在于,所述4-氧代癸酸还原酶突变体的氨基酸序列选自如下中的一种:
(1)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第134位亮氨酸替换为缬氨酸;
(2)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第182位天冬氨酸替换为丝氨酸;
(3)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第134位亮氨酸替换为精氨酸;
(4)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第182位天冬氨酸替换为缬氨酸。
2.一种分离的核酸,其特征在于,所述的核酸编码如权利要求1所述的4-氧代癸酸还原酶突变体。
3.一种重组表达载体,其特征在于,所述重组表达载体包含如权利要求2所述的核酸。
4.一种重组表达转化体,其特征在于,所述重组表达转化体包含如权利要求3所述的重组表达载体。
5.一种重组4-氧代癸酸还原酶突变体催化剂,其特征在于,所述种重组4-氧代癸酸还原酶突变体催化剂是以下形式中的任意一种:
(1)培养如权利要求4所述的重组表达转化体,分离含有所述4-氧代癸酸还原酶突变体的转化体细胞;
(2)培养如权利要求4所述的重组表达转化体,分离含有所述4-氧代癸酸还原酶突变体的粗酶液;
(3)将所述4-氧代癸酸还原酶突变体的粗酶液干燥得到的粗酶粉。
6.一种如权利要求1所述4-氧代癸酸还原酶突变体或如权利要求5所述重组4-氧代癸酸还原酶突变体催化剂作为催化剂在不对称还原4-氧代癸酸化合物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述4-氧代癸酸还原酶突变体或所述重组4-氧代癸酸还原酶突变体催化剂催化羰基化合物不对称的还原反应在葡萄糖脱氢酶,葡萄糖,辅酶NADPH或NADP+中进行。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述葡萄糖脱氢酶的用量可为50~200U/mmol潜手性羰基化合物,所述葡萄糖的用量可为潜手性羰基化合物摩尔量的1.5倍,所述辅酶NADPH或NADP+的用量为0.1~0.5mmol/L。
9.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,潜手性羰基化合物的浓度为2-20mmol/L,所述4-氧代癸酸还原酶突变体或所述重组4-氧代癸酸还原酶突变体催化剂的用量选用为5-20U/mmol潜手性羰基化合物。
10.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,反应在振荡或搅拌条件下进行;温度为20~40℃,反应时间以底物完全反应完或反应自行终止的时间为准。
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