[发明专利]具有肝癌细胞毒性和α-葡萄糖苷酶抑制活性的环cyclo色苏酪异亮苯丙肽及制备方法

说明书

本发明涉及具有肝癌细胞毒性和α‑葡萄糖苷酶抑制活性的环cyclo色苏酪异亮苯丙肽（cyclo‑Trp‑Thr‑Tyr‑Ile‑Phe环肽）及制备方法，属于生物制品的提取制备技术领域。所述环cyclo‑色‑苏‑酪‑异亮‑苯丙肽是由cyclo‑色氨酸、苏氨酸、酪氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸，以酰胺键连接而成的十五元环状五肽。这是一个新型化合物，尚无文献报道。本发明化合物可通过培养蛙粪霉，然后提取分离得到。环cyclo‑色‑苏‑酪‑异亮‑苯丙肽纯品为白色粉末，对肝癌细胞HepG2的半抑制浓度（IC₅₀）为：111.07μg/mL，α‑葡萄糖苷酶的半抑制浓度（IC₅₀）为：1103.87μg/mL。该化合物可能作为治疗肝癌和减肥药的潜在药物。

技术领域

本发明属于生物制品的提取制备技术领域，涉及具有肝癌细胞毒性和α-葡萄糖苷酶抑制活性的环cyclo-色-苏-酪-异亮-苯丙肽（cyclo-Trp-Thr-Tyr-Ile-Phe环肽）提取和纯化。

背景技术

环cyclo-色-苏-酪-异亮-苯丙肽是从一种蛙粪霉(Basidiobolussp. )培养物中分离制备得到的具有肝癌细胞毒性和α-葡萄糖苷酶抑制活性的生物活性物质。

蛙粪霉(Basidiobolussp. )为虫霉目蛙粪霉科蛙粪霉属的真菌；在我国常见的有蛙生蛙粪霉、固孢蛙粪霉和裂孢蛙粪霉等。上述菌种可从土壤和两栖类动物粪便中分离得到。

细胞毒性：目前，癌症在中国患发率持续增长，已成为不可忽视的公共卫生挑战。据公开数据统计，2020年全国新发肿瘤病例和死亡人数均名列全球第一，肿瘤预防与治疗道阻且。在癌症的治疗过程中，相当重要的一个环节就是药物治疗，使用有效的抗癌药物，可以帮助患病的人获得更长的生存时间。通过细胞毒性实验可以评估药物的有效性、毒性、耐药性、药物对癌细胞凋亡、增殖等作用的影响，对新的抗癌药物的研发具有重要价值。

α-葡萄糖苷酶抑制活性：2型糖尿病(T2DM)已成为严重的公共卫生问题，到2030年将影响全球5亿人的生活。T2DM 的特征是碳水化合物、脂质和蛋白质代谢紊乱，这是由胰腺β细胞分泌的胰岛素逐渐减少引起。α-葡萄糖苷酶被确定为治疗 T2DM 和碳水化合物疾病的核心靶。位于肠细胞刷状缘表面膜的α-葡萄糖苷在碳水化合物消化中将双糖或寡糖水解成单糖。因此，抑制α-葡萄糖苷酶活性可以延缓碳水化合物的消化，从而缓解T2DM。α-葡糖苷酶抑制剂在抑制剂与二糖或寡糖之间竞争结合到α-葡萄糖苷酶，从而导致α-葡萄糖苷酶的抑制活性以及碳水化合物水解和葡萄糖吸收的减少。

发明内容

本发明的目的是提供具有肝癌细胞毒性和α-葡萄糖苷酶抑制活性的环cyclo-色-苏-酪-异亮-苯丙肽及制备方法。

为寻找新型天然高效的具有肝癌细胞毒性和α-葡萄糖苷酶抑制活性的物质，发明人通过对中国的100余株昆虫病原真菌代谢物进行活性研究，发现了从一种蛙粪霉中提取的环cyclo-色-苏-酪-异亮-苯丙肽具有肝癌细胞毒性和α-葡萄糖苷酶抑制活性的作用。

具有肝癌细胞毒性和α-葡萄糖苷酶抑制活性的环cyclo-色-苏-酪-异亮-苯丙肽的结构式如下：

所述环cyclo-色-苏-酪-异亮-苯丙肽是由cyclo-色氨酸、苏氨酸、酪氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸，以酰胺键连接而成的十五元环状五肽；

所述环cyclo-色-苏-酪-异亮-苯丙肽具有肝癌细胞毒性和α-葡萄糖苷酶抑制活性；

对肝癌细胞HepG2的半抑制浓度（IC₅₀）为：111.07 μg/mL，α-葡萄糖苷酶的半抑制浓度（IC₅₀）为：1103.87 μg /mL。

具有肝癌细胞毒性和α-葡萄糖苷酶抑制活性的环cyclo-色-苏-酪-异亮-苯丙肽的制备操作步骤如下：

（1）菌种培养