[发明专利]一种自发强直性脊柱炎模型的构建方法和应用

权利要求书

1.一种自发强直性脊柱炎非人类动物模型的构建方法，其特征在于，所述强直性脊柱炎非人类动物模型表达突变型BMP9蛋白；

优选地，所述非人类动物模型指具有或显示出疾病或病状的特征的非人类动物；

优选地，所述突变型BMP9蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述强直性脊柱炎非人类动物模型表达突变型BMP9蛋白的方法包括如下步骤：将编码所述突变型BMP9蛋白的核酸分子导入非人类动物的单细胞胚胎或胚胎干细胞；

优选地，所述强直性脊柱炎非人类动物模型表达突变型BMP9蛋白的方法包括如下步骤：将包含所述突变型BMP9蛋白的核酸分子的表达载体导入非人类动物的单细胞胚胎或胚胎干细胞；

优选地，所述核酸分子包含以下序列：野生型BMP9基因的CDS序列上第948位核苷酸由G突变为T后形成的核苷酸序列；

优选地，所述表达载体包括但不限于线性多核苷酸、质粒和病毒载体；

优选地，所述病毒载体包括但不限于慢病毒载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述表达载体导入方法包括电穿孔法、磷酸钙法、脂质体法、DEAE葡聚糖法、显微注射、病毒感染或脂质体转染。

4.根据权利要求1-3任一项所述的构建方法，其特征在于，所述非人类动物是啮齿动物。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述啮齿动物包括以下选项：

1)丽仓鼠科如丽仓鼠、巴氏丽仓鼠、古氏丽仓鼠、锦丽仓鼠、郝氏丽仓鼠、髯丽丽仓鼠、楚氏丽仓鼠、乌拉特丽仓鼠；

2)仓鼠科如黑线仓鼠、田鼠、冠鼠；

3)鼠科如黑鼠、褐鼠、沙鼠、新世界大鼠、旧世界大鼠、挪威种大鼠、波里尼西亚大鼠、树大鼠、棉花大鼠、木头大鼠、棍棒大鼠、稻米大鼠、袋鼠大鼠、攀鼠；

4)马岛鼠科如长尾巨鼠、南非囊鼠、非洲巨鼠、马岛白尾鼠；

5)刺山鼠科如刺山鼠、猪尾鼠；

6)鼹形鼠科如鼹鼠、竹鼠、鼢鼠；

7)棘鼠科如棘鼠；

8)岩鼠科如非洲岩鼠。

6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述强直性脊柱炎非人类动物模型表现出脊柱侧弯、胸骨突出、关节僵硬、尾巴强直、前肢畸形、后肢骶髂关节畸形、脊柱骨质增生、脊柱骨质融合、骨密度显著降低、骨小梁显著减少中的一种及以上的症状。

7.一种鉴定用于治疗强直性脊柱炎的治疗剂的方法，其特征在于，所述方法包含以下步骤：

1)向权利要求1所述的构建方法制备的强直性脊柱炎非人类动物中施用药剂；

2)进行一种或多种测定以确定所述药剂是否对强直性脊柱炎相关的一种或多种异常症状具有治疗效果；

3)当所述药剂对强直性脊柱炎相关的一种或多种异常症状具有治疗效果时，将所述药剂鉴定为治疗剂；

优选地，所述治疗剂包括非甾体抗炎剂、激素制剂、靶向小分子制剂、蛋白酶体抑制剂、免疫抑制剂、肿瘤坏死抑制剂、细胞因子、共刺激分子的激活剂、抑制性分子的抑制剂。

8.强直性脊柱炎非人类动物模型在筛选用于治疗或预防强直性脊柱炎的药物中的应用，其特征在于，所述强直性脊柱炎非人类动物模型是使用权利要求1所述的构建方法制备的模型；

优选地，所述药物包括一种或多种药学上可接受的赋形剂；

优选地，所述赋形剂包括黏合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、软膏剂、防腐剂、抗氧化剂、矫味剂、芳香剂、助溶剂、乳化剂、增溶剂、渗透压调节剂、着色剂。

9.强直性脊柱炎非人类动物模型在评估治疗强直性脊柱炎的产品的治疗效果中的应用，其特征在于，所述强直性脊柱炎非人类动物模型是使用权利要求1所述的构建方法制备的模型。

10.突变型BMP9蛋白或合成其的核苷酸序列在构建自发强直性脊柱炎非人类动物模型中的应用，其特征在于，所述突变型BMP9蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；

优选地，所述合成突变型BMP9蛋白的核苷酸序列包含以下序列：野生型BMP9基因的CDS序列上第948位核苷酸由G突变为T后形成的核苷酸序列。