[发明专利]一种测定人血浆中阿普斯特浓度的检测方法

说明书

本发明涉及药物分析技术领域，尤其涉及一种测定人血浆中阿普斯特浓度的检测方法。所述血浆中阿普斯特浓度的检测方法，包括以下步骤：将含阿普斯特的血浆、阿普斯特‑d5的乙腈溶液混合进行沉淀反应，将所得上清液分别注入液相色谱‑质谱仪，进行多反应监测反应，用内标法以标准曲线计算血浆中阿普斯特的含量，所述标准曲线以阿普斯特的浓度为横坐标，以阿普斯特和阿普斯特‑d5的峰面积比值为纵坐标。本发明基于沉淀法和液质联用技术进行血浆中阿普斯特的检测，可用于检测生物体内的阿普斯特浓度，提供了一种快速、准确、稳定的检测方法。

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，尤其涉及一种血浆中阿普斯特浓度的检测方法。

背景技术

阿普斯特是一种口服的环单磷酸腺苷（cAMP）特异性磷酸二酯酶-4（PDE4）小分子抑制剂。PDE4的抑制能够升高细胞内的cAMP水平，PDE4降解cAMP可导致免疫细胞激活和促炎细胞因子释放。因此抑制PDE4可能能够降低PDE4介导的炎症反应。阿普斯特片，2014年03月21日在美国获批上市销售，批准的适应症为活动性银屑病关节炎，适用光疗或者系统治疗的中度至重度斑块状银屑病和与白塞病相关的口腔溃疡。2014年9月，FDA 批准阿普斯特用于治疗中重度斑块状银屑病。由于其有希望的治疗结果和安全性，该药物分子在皮肤病学中变得非常流行。据研究报道，目前国内有关测定人体内阿普斯特血药浓度的方法尚未研究，而测定其在生物体内的血浆药物浓度对于评价药物疗效和分析药理作用等方面具有很重要的作用，因此开发一种测定血浆中阿普斯特浓度的检测方法，进行阿普斯特在中国健康受试者空腹及餐后状态下体内的药动学及人体生物等效性研究，不仅可以为阿普斯特相关制剂一致性评价提供依据，而且具有广泛的经济效益和社会效益。

发明内容

为解决现有技术存在的技术问题，本发明的目的在于提供一种血浆中阿普斯特浓度的检测方法。本发明基于沉淀法和液质联用技术进行血浆中阿普斯特的检测，可用于检测生物体内的阿普斯特浓度，提供了一种快速、准确、稳定的检测方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种血浆中阿普斯特浓度的检测方法，包括以下步骤：

将含阿普斯特的血浆、阿普斯特-d5的乙腈溶液混合进行沉淀反应，涡旋混合5min，置4 ℃台式高速冷冻离心机（96孔板）中，4750 r/min离心10 min，每孔取上清100 µL，转移至另一96孔板，每孔加10%乙腈水溶液100 µL稀释，涡旋混合5 min后，进行液质联用检测，用内标法以标准曲线计算血浆中阿普斯特的含量，所述标准曲线以阿普斯特的浓度为横坐标，以阿普斯特和阿普斯特-d5的峰面积比值为纵坐标。

进一步地，所述液质联用检测的高效液相色谱条件包括：色谱柱为PhenomenexKinetex C18 (2.1×50 mm，2.6 µm)色谱柱，采用梯度洗脱，流动相A为含0.1%甲酸的水溶液，流动相B为0.1 %甲酸乙腈溶液，洗脱程序为0~0.5 min，流动相A的体积百分含量保持63%，流动相B的体积含量保持37%；0.5~1.3 min，流动相A的体积百分含量从63%下降到0.0%，流动相B的体积百分含量从37%上升到100%；1.3~2.4 min，流动相A的体积百分含量保持0.0%，流动相B的体积含量保持100%；2.4~2.41 min，流动相A的体积百分含量从0.0%上升到63%，流动相B的体积百分含量从100%下降到37%；2.41~3 min，流动相A的体积百分含量保持63%，流动相B的体积含量保持37%，流速为0.45 mL/min，柱温为40℃，进样量为5 µL；