[发明专利]一种心肌缺血再灌注模型的建立和评价方法

说明书

本发明公开了一种心肌缺血再灌注模型的建立和评价方法，包括：术前称重和麻醉固定、气管插管、冠状动脉左前降支双针结扎、术后缝合以及待动物恢复自主呼吸拔出气管插管等步骤。本发明提供的心肌缺血再灌注模型的建模成功率和模型稳定性提升，所需样本量显著减少，模型评价指标更加全面准确。

技术领域

本发明属于动物模型构建技术领域，涉及一种心肌缺血再灌注模型的建立和评价方法。

背景技术

缺血再灌注损伤(Ischemia-Reperfusion Injury，IRI)是指组织器官缺血后血液再灌注，不仅不能使组织器官功能恢复，反而加重组织器官的功能障碍和结构损伤。

急性冠状动脉梗阻性疾病是目前心血管疾病的主要致死原因之一。急性心肌缺血后，恢复冠状动脉血流(再灌)本身又会导致心肌细胞损伤及死亡，这一现象称为心肌缺血再灌注损伤，占总心肌损伤的40％-50％，是导致心肌梗死不良预后的重要因素。

目前心肌缺血再灌注损伤建模方法和缺点：

1、心脏原位结扎：建模成功率较低，梗死稳定性较差；

2、挤心脏法：心脏挤出，一定程度上破坏了原始生理结构，因操作迅速一般不连接呼吸机，导致后续再灌注不易操作(二次挤出心脏或者体外留线，再灌注效果不确切)。

现有的建模方法都是在冠状动脉左前降支进行单次结扎，结扎一段时间后再打开结扎部位完成缺血再灌。结扎有完全结扎和部分结扎两种方式，单次完全结扎被认为是完全阻断了结扎处的血流，部分结扎的方式被认为是部分阻断结扎处血流。单次完全结扎后引起供血部位心肌细胞的完全缺血，模拟临床心肌梗死，缺血一定时间后打开结扎位点，模拟临床再灌。该模型梗死比例变化大，模型稳定性较差，增加了统计学误差，每组动物样本量要求大。

现有的模型评价指标单一、不够准确：a.肉眼观察结扎前后心肌颜色变化；b.心电指标上目前采用的II导联监测不能准确、合理地监测缺血损伤部位；c.再灌注损伤启动于再灌早期数分钟，并继续以包含大量交互式机制的级联方式进展数分钟或数小时，但目前在术中超急性期使用超声监测大鼠心功能的几乎无，大/小鼠心梗/衰模型一般会在一周、一个月、两个月采用超声监测心功能。

因此，亟需一种梗死相对稳定、评价指标相对全面准确的心肌缺血再灌注模型的建立方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种梗死相对稳定、评价指标相对准确全面的动物心肌缺血模型和心肌缺血再灌注模型的建立和评价方法，以克服现有的模型稳定性较差，评价指标单一、不准确等技术难题。

在第一个方面，本发明提供一种动物心肌缺血模型的建立方法，包括以下步骤：

(1)术前称重和麻醉固定：

根据动物(例如，大鼠)体重，腹腔注射适量的麻醉剂，对动物进行麻醉；将麻醉后动物胸腔部位备皮，消毒；仰卧位固定于手术台；

所述麻醉剂可以为本领域常用的麻醉剂(例如，气体麻醉和注射用麻醉剂)，例如10％水合氯醛，注射剂量可以采用常规剂量以达到麻醉效果即可，例如，针对大鼠，10％水合氯醛的注射剂量为0.3-0.35ml/100g，如0.35ml/100g；

(2)气管插管：

打开呼吸机，调节呼吸机参数，经口进行气管插管；

呼吸机参数可以根据动物进行调整，针对大鼠，可以为：潮气量：100g/1mL；呼吸比：1:1；呼吸频率：80-85次/min；

(3)冠状动脉左前降支双针结扎：

1)动物胸廓纵向剪开皮肤，暴露肌肉层，沿肌肉走向剪开，使用弯镊将胸肌逐层钝性分离暴露肋骨，于第4、5肋间用弯头剪打开胸腔，暴露心脏，撕开心包膜，暴露主动脉圆锥及左心耳；