[发明专利]一种改性细菌纤维素及其培养基和制备方法在审
申请号: | 202211525393.9 | 申请日: | 2022-12-01 |
公开(公告)号: | CN116004447A | 公开(公告)日: | 2023-04-25 |
发明(设计)人: | 陈帅;马挺;李国强;高歌;牛少芳;刘童童;赵雪晴 | 申请(专利权)人: | 南开大学 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C12P19/04;C12R1/01 |
代理公司: | 天津耀达律师事务所 12223 | 代理人: | 廖晓荣 |
地址: | 300071*** | 国省代码: | 天津;12 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 改性 细菌 纤维素 及其 培养基 制备 方法 | ||
1.一种用于培养改性细菌纤维素产生菌株的HS-XGK-Mag培养基,其特征在于,以质量浓度计,在HS-XGK发酵培养基的基础上添加0.1g/L~2.5g/L的水不溶性改性剂厚朴酚。
2.根据权利要求1所述的HS-XGK-Mag培养基,其特征在于,以质量浓度计,HS-XGK-Mag培养基包括1.5g/L的厚朴酚、1.0g/L的黄原胶、7.5g/L的酵母粉、10g/L的蛋白胨、10g/L的Na2HPO4、1.0g/L的KNO3和25g/L的葡萄糖。
3.一种HS-XGK-Mag培养基的配制方法,其特征在于,用于配制如权利要求1所述的HS-XGK-Mag培养基,包括:
将葡萄糖、蛋白胨、酵母粉、Na2HPO4、KNO3充分溶解于水中,以得到基础混合液;
向所述基础混合液中缓慢加入黄原胶,并于25℃-50℃温度下充分搅拌至其完全溶解,以得到基础悬浮体系;
向所述基础悬浮体系中缓慢加入厚朴酚,混匀,以得到HS-XGK-Mag培养基。
4.一种改性细菌纤维素,其特征在于,改性细菌纤维素为FY-07菌株于权利要求1所述的HS-XGK-Mag培养基中培养得到的膜结构物质,所述改性细菌纤维素的表面均匀且密集分布大量白色颗粒状厚朴酚,所述改性细菌纤维素中存在黄原胶和细菌纤维素的典型官能团,所述改性细菌纤维素的结晶度为60.6%、持水率大于17000%、溶胀率最高为4160.6%,所述改性细菌纤维素对革兰氏阳性菌和真菌的抑菌率最高至100%、对革兰氏阴性菌的抑菌率最高至72%,在所述改性细菌纤维素上培养的细胞活性大于94%。
5.一种利用水不溶性改性剂制备改性细菌纤维素的方法,其特征在于,包括:
扩大培养细菌纤维素产生菌株FY-07,以获得同时含有菌株FY-07和其产物细菌纤维素的种子液;
将所述种子液以0.1%~10%的接种量接种至液态的权利要求1所述HS-XGK-Mag培养基中,25℃~37℃内培养18h~48h,以获得改性细菌纤维素膜;
将所述改性细菌纤维素膜从HS-XGK-Mag培养基中捞出,清理掉附着在所述改性细菌纤维素膜表面的细菌、残留培养基以及杂质,以得到改性细菌纤维素湿膜。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,获得所述种子液的步骤中,包括:
将细菌纤维素产生菌株FY-07的菌液划线培养于含有0.1%(w/v)刚果红的LB固体培养基中,于25℃~37℃温度下培养24h,以获得FY-07单菌落;
挑取所述FY-07单菌落密集划线于LB固体斜面培养基中,于25℃~37℃下培养24h,以获得含有FY-07活菌株的细菌纤维素膜;
挑取所述含有FY-07活菌株的细菌纤维素膜,再次密集划线于LB固体斜面培养基中,于25℃~37℃下培养24h,以获得含有大量FY-07活菌株和细菌纤维素膜的培养基表面;
用100mL的无菌蒸馏水冲洗所述培养基表面,直至所述培养基表面上的FY-07活菌株和细菌纤维素膜脱离到所述无菌蒸馏水中,将含有FY-07活菌株和细菌纤维素膜的蒸馏水混匀,以获得种子液。
7.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,获得所述改性细菌纤维素湿膜的步骤中,包括:
将所述改性细菌纤维素膜从HS-XGK-Mag培养基中捞出,用无菌水进行冲洗;
用0.5M的NaOH溶液于100℃条件下浸泡处理冲洗后的改性细菌纤维素膜0.5h,以除去改性细菌纤维素膜中的菌体和残留培养基;
重复所述水洗步骤和所述浸泡步骤,直至所述改性细菌纤维素膜的pH值为中性,以得到改性细菌纤维素湿膜。
8.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,获得所述改性细菌纤维素湿膜后,进行干燥操作,以得到改性细菌纤维素干膜。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,获得所述改性细菌纤维素干膜的操作中,所述干燥操作为烘干或真空冷冻干燥。
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