[发明专利]一种高灵敏度定量检测SEB的方法

权利要求书

1.一种高灵敏度定量检测SEB的方法，其特征在于，其包括如下步骤：

1)制备AuNP颗粒：

通过柠檬酸钠还原法和二次生长法制备直径为15-80nm的AuNP颗粒；

2)采用共价交联法制备AuNP标记的SEB检测抗体：

在碱性条件下先将所述AuNP颗粒的溶液中加入配体对AuNP进行修饰，并利用酰胺键偶联剂活化AuNP表面的-COOH再与SEB检测抗体形成共价结合，得到AuNP标记的SEB检测抗体；

3)依照双抗体夹心法的步骤生成基于AuNP粒子偶联检测抗体检测SEB的双抗体夹心复合物：

先将SEB捕获抗体经包被缓冲液稀释后加入ELISA板中放置，然后加入SEB标准品孵育，再加入所述AuNP标记的SEB检测抗体孵育，形成双抗体夹心复合物；所述SEB标准品为不同浓度的SEB标准品，对应形成不同浓度的标准系列的双抗体夹心复合物；

4)以金原子的含量和SEB标准品浓度绘制标准曲线：

先分别将强酸溶解步骤3)得到的不同浓度的标准系列的双抗体夹心复合物，然后通过GAAFS分别测定所述双抗体夹心复合物中不同金原子的含量，绘制以金原子的含量和SEB标准品浓度的标准曲线；

5)定量检测待测样品的SEB浓度：

将待测样品依据步骤3)，与AuNP标记的SEB检测抗体以及SEB捕获抗体形成待测双抗体夹心复合物；然后依据步骤4)通过GAAFS测定待测样品的金原子的含量，依据标准曲线得到待测样品中SEB浓度。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，所述柠檬酸钠还原法采用先将四氯金酸溶液加热至沸腾，然后迅速加入柠檬酸钠溶液并搅拌，直到AuNP胶体形成。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，所述二次生长法采用先将所述AuNP胶体水溶液加入还原剂中进行搅拌，然后慢慢加入四氯金酸溶液，最终获得所需直径的AuNP胶体。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述AuNP颗粒的直径为40-80nm。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中，所述碱性条件为pH为9-11；所述配体为HS-PEG-COOH或十一巯基十一烷酸；所述酰胺键偶联剂为EDC、NHS或马来酰亚胺。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述配体的浓度为0.01-0.02mmol/L；所述酰胺键偶联剂的浓度为1-1.5mmol/L。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中，所述AuNP与所述SEB检测抗体的用量比为1:1-1.2。

8.根据权利要求1或7所述的方法，其特征在于，步骤3)中，所述SEB捕获抗体的浓度为5-10μg/mL，所述AuNP标记的SEB检测抗体的浓度为1-5μg/mL。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中，先经强酸溶解处理所述双抗体夹心复合物10-20min，然后经煮沸再通过石墨炉原子吸收光谱仪检测金原子。

10.一种采用权利要求1-9任意一项所述方法用于检测SEB含量中的应用。